海洋微生物N2a過(guò)氧化氫酶性質(zhì)、保存穩(wěn)定性及固定化的研究.pdf

1、過(guò)氧化氫酶是一種能夠高效催化分解過(guò)氧化氫的酶，廣泛應(yīng)用于食品消毒、臨床分析、醫(yī)學(xué)診斷以及紡織、造紙、制漿等工業(yè)。本論文對(duì)海洋微生物N2a過(guò)氧化氫酶酶學(xué)性質(zhì)、保存穩(wěn)定性、應(yīng)用潛力以及固定化等方面進(jìn)行了研究。 對(duì)該新型海洋微生物N2a過(guò)氧化氫酶進(jìn)行初步純化，并對(duì)N2a過(guò)氧化氫酶的基本酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究，結(jié)果表明：過(guò)氧化氫酶最適作用溫度為30℃，pH在6-11時(shí)，過(guò)氧化氫酶的活性沒(méi)有顯著變化，有較寬且偏堿的最適pH范圍；不同溫度恒溫水浴

2、處理2h后，30℃下過(guò)氧化氫酶活保留率在90％以上，而60℃時(shí)活性僅為初始酶活的6.8％；在不同pU的緩沖體系里于4℃下放置48 h后，在pH6-8范圍內(nèi)酶活性較穩(wěn)定，該酶在堿性條件下相比在酸性條件下更穩(wěn)定；Mn2+對(duì)酶有較好的激活作用；Ca2+、Mg2+、K+、NH4+對(duì)酶無(wú)影響；Zn2+、Li+、Sr2+、Ba2+、Ag+對(duì)酶有抑制作用；微生物過(guò)氧化氫酶與大部分非金屬離子配伍性良好；NaCl濃度為0-1.0mol/L時(shí)，對(duì)過(guò)氧化氫酶

3、的活性沒(méi)有顯著影響，NaCl濃度為1.0-2.0mol/L時(shí)，酶活力逐漸下降，NaCl濃度≥3.0mol/L時(shí)，過(guò)氧化氫酶失活。 過(guò)氧化氫酶較不穩(wěn)定，在存放過(guò)程中酶的活力損失較大。加入明膠、氯化鈣、甘油、氯化鈉以及戊二醛等不同穩(wěn)定劑后，酶活保留率都有明顯的提高，其中鹽析后置于Tris緩沖液中的酶液加甘油穩(wěn)定性最好。向其中加入甘油90g/L，在30℃保存60 d酶活保留率為70.3％。 將N2a所產(chǎn)的過(guò)氧化氫酶同來(lái)源于牛肝

4、的過(guò)氧化氫酶進(jìn)行了熱(60℃、70℃)、堿(9.0、10.0、11.0)穩(wěn)定性的比較。結(jié)果顯示，N2a所產(chǎn)的過(guò)氧化氫酶對(duì)高溫和強(qiáng)堿性的耐受性明顯優(yōu)于牛肝過(guò)氧化氫酶，在紡織染整工藝中具有良好的應(yīng)用潛力。 以海藻酸鈉為載體采用包埋法制備固定化過(guò)氧化氫酶，對(duì)其最佳固定化條件與酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：海藻酸鈉濃度2％，氯化鈣濃度3％，給酶量40 ml，固定化時(shí)間45 min，在此條件下制備的固定化過(guò)氧化氫酶活性保持率為37.2％。