川芎嗪對(duì)子癇前期患者腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa通道的作用.pdf

1、目的:子癇前期（preeclampsia，PE）是妊娠期高血壓疾病的一種，是產(chǎn)科嚴(yán)重的并發(fā)癥，對(duì)母兒的健康造成嚴(yán)重威脅。全身小動(dòng)脈痙攣是子癇前期-子癇的基本病變。使用有效藥物解除小動(dòng)脈痙攣可在降壓的同時(shí)改善全身微循環(huán)障礙及組織缺血缺氧，改善母嬰結(jié)局。目前硫酸鎂是廣泛應(yīng)用于臨床的解痙藥物，但是因其治療劑量與中毒劑量接近使其副反應(yīng)及不良反應(yīng)較多，使其在臨床應(yīng)用無較高安全性及有效性。中藥制劑川芎嗪（tetramethylpyrazine，TM

2、p）在心血管疾病有顯著的療效使產(chǎn)科臨床工作者開始關(guān)注并應(yīng)用于臨床妊娠高血壓綜合征的治療，發(fā)現(xiàn)TMp（或者聯(lián)合硫酸鎂）治療妊娠高血壓綜合征能有效改善患者的臨床癥狀，減少并發(fā)癥的發(fā)生，有較高安全性及有效性[1～6]。但TMp治療妊娠高血壓綜合征的機(jī)制現(xiàn)不明確。研究發(fā)現(xiàn)，TMp可激活正常人體腸系膜血管平滑肌細(xì)胞大電導(dǎo)鈣激活鉀通道[7](big conductance Ca2+-activated channel，BKCa)。當(dāng)BKCa通道被激

3、活，細(xì)胞膜發(fā)生超級(jí)化，抑制電壓依賴性鈣通道的活性，減少了Ca2+的內(nèi)流，血管舒張，血壓下降[8]。因此血管平滑肌中的BKCa通道是主要參與血管平滑肌張力調(diào)節(jié)的離子通道。腸系膜動(dòng)脈作為形成外周阻力的主要血管，對(duì)血壓調(diào)節(jié)具重要作用。前期研究證實(shí)TMp對(duì)PE患者胎盤小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa通道有激活作用，且這種激活作用有一定的濃度依賴性。本實(shí)驗(yàn)采用單通道膜片鉗技術(shù)，觀察PE患者腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的BKCa通道的變化，以及在TMp作用下PE患

4、者腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的BKCa通道的變化，探討TMp對(duì)PE的作用機(jī)制，為尋找更有價(jià)值的治療藥物有極重要的理論與實(shí)踐意義，為PE的治療提供一定的理論依據(jù)。
　　方法:(1)取診斷為子癇前期并行剖宮產(chǎn)手術(shù)的患者為PE組（15例）;取同期無產(chǎn)科并發(fā)癥和合并癥，因瘢痕子宮和骨盆因素行剖宮產(chǎn)的足月產(chǎn)婦為NLP(normol late pregnancy)組（10例）。選取其直徑為1-2mm為的腸系膜動(dòng)脈，顯微鏡下剔除血管周圍組織后將其剖開

5、并剪成2mm2大小，應(yīng)用兩步急性酶分離法獲得單個(gè)平滑肌細(xì)胞。選取立體感較強(qiáng)，表面光滑的平滑肌細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(2)貼壁的細(xì)胞置于對(duì)稱性高鉀溶液中，在內(nèi)面向外膜片下觀察兩組腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa通道的活性變化;(3)在+40mv去極化電壓條件下，PE組細(xì)胞其中10例在較低濃度(mmol/L)TMp的作用下(0.73、2.20、3.67、5.14)，另外5例在較高濃度(mmol/L)TMp的作用下(6.60、8.07、9.51)，都分別

6、在貼附式和內(nèi)面向外式膜片上記錄通道的電流。(4)所得電流數(shù)據(jù)通過膜片鉗放大器(CEZ-2200)輸入計(jì)算機(jī)，用Pclamp(6.0)軟件系統(tǒng)采集電流，Clampfit10.1軟件系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
　　結(jié)果:1.在對(duì)稱性高鉀溶液中，內(nèi)面向外式膜片上記錄到的人腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的BKCa單通道符合BKca通道的特點(diǎn):電導(dǎo)值較高，為227.11±12.365pS(n=10);有明顯的電壓依賴性和鈣敏感性;在+30mv的去極化電壓下2

7、00nM的北非蝎毒素(Iberiotoxin，IbTx)幾乎完全阻斷通道的電流活動(dòng)。2.在游離鈣濃度為10-7M的對(duì)稱性高鉀溶液中(Vm=+40mv)，內(nèi)面向外式膜片上記錄的BKCa通道電流顯示:與NLP組相比，PE組BKCa通道的NPo、Amp、To減少，Tc延長(zhǎng)(n=10，P＜0.05)。3.在游離鈣濃度為10-7M的對(duì)稱性高鉀溶液中(Vm=+40mv)，改變?cè)∫褐蠺Mp的濃度(1)在PE組（較低TMp濃度組）細(xì)胞:在貼附式膜片上B

8、KCa的NPo、Amp、To、Tc無明顯變化(n=10，P＞0.05);而在內(nèi)面向外膜片上BKca通道的NPo增加、Tc縮短(n=10，P＜0.05)，To有所減少、Amp無明顯變化(n=10，P＞0.05)。(2) PE組（較高TMp濃度組）細(xì)胞:在貼附式膜片上BKCa通道的NPo、Amp、To、Tc無明顯變化(n=5，P＞0.05);而在內(nèi)面向外膜片上當(dāng)TMp的濃度達(dá)8.07mmol/L時(shí)，再增加藥物濃度BKca通道的NPo未繼續(xù)增

9、加、Tc未繼續(xù)縮短、Amp、To無明顯變化(n=5，P＞0.05)。
　　結(jié)論:1、PE患者腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的BKCa通道活性較正常妊娠時(shí)被抑制。2、在貼附式膜片上，不同濃度TMp對(duì)PE患者腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的BKCa通道活性無明顯影響。3、在內(nèi)面向外式膜片上，一定濃度范圍內(nèi)TMp對(duì)PE患者腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的BKCa通道有激活作用，且這種激活作用有一定的濃度依賴性。4、TMp治療PE時(shí)在細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)都可對(duì)BKca通道發(fā)