重度子癇前期子宮小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞大電導(dǎo)鈣激活鉀通道的改變.pdf

1、 目的：重度子癇前期(Severe preeclampsia,SPE)屬于妊娠期高血壓疾病的一類。妊娠期高血壓疾病的基本病理變化是全身小動(dòng)脈痙攣,外周阻力血管的張力增加。血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)參與了血管的張力調(diào)節(jié),主要是通過(guò)其上的離子通道發(fā)揮作用。其中,大電導(dǎo)鈣激活鉀通道(large conductance calcium-activated potassium cha

2、nnels, BKCa)的開(kāi)放和關(guān)閉對(duì)血管的舒縮起重要影響。重度子癇前期時(shí),血壓的增高是否與大電導(dǎo)鈣激活鉀通道的改變具有相關(guān)性對(duì)我們研究其發(fā)病機(jī)制有重要意義。因此,本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用膜片鉗技術(shù)從離子通道水平研究重度子癇前期是否與BKCa通道改變有關(guān),為揭示該病的發(fā)病機(jī)理以及防治提供一定的理論依據(jù)。方法：運(yùn)用單通道膜片鉗實(shí)驗(yàn)將于2012年6月至2013年3月在我院產(chǎn)科住院分娩,無(wú)其它并發(fā)癥和合并癥,需要進(jìn)行剖宮產(chǎn)手術(shù)的患者分為兩組：重度子癇前期

3、8 例、正常足月妊娠( Normal late pregnancy)8例,取子宮剖面含豐富血竇的肌層組織,分離子宮動(dòng)脈,縱向剖開(kāi)并撕成約2 mm×2 mm的組織塊,分別置于酶液Ⅰ和酶液Ⅱ中進(jìn)行消化。選擇胞膜完整、光滑、折光性佳的平滑肌細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在浴液中,用膜片鉗分別以細(xì)胞貼附式和內(nèi)面向外式記錄細(xì)胞膜上 BKCa的電流信號(hào),并將濾波處理過(guò)的膜片鉗放大器放大的電流信號(hào)儲(chǔ)存于計(jì)算機(jī)中,經(jīng)pClamp 6.0軟件系統(tǒng)采集電流信號(hào),Clamp

4、fit 10.1軟件分析數(shù)據(jù)。比較正常妊娠晚期和重度子癇前期的孕婦子宮動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 BKCa電流信號(hào)的變化。結(jié)果：1、采用兩步法急性酶分離出的妊娠期人子宮小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞數(shù)量較多,成活率高。細(xì)胞大多呈蚯蚓狀、梭形﹑或是香蕉狀,包膜完整,折光性好,能滿足膜片鉗實(shí)驗(yàn)需要；2、兩步法急性酶分離的妊娠期人子宮小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa單通道電流具有以下特性：(1)浴液與電極液為對(duì)稱性高鉀溶液,內(nèi)面向外式膜片下,記錄到BKCa通道的電導(dǎo)值為 20

5、7.2±12.7 pS(n=8),通道具有電壓依賴性和鈣離子敏感性。(2)在外面向外式膜片下(Vm=+30 mV),200 nM的BKCa通道特異性阻斷劑 IbTX(Iberiotoxin)能阻斷通道活動(dòng)。3、重度子癇前期孕婦子宮動(dòng)脈平滑肌BKCa的變化：在細(xì)胞貼附式膜片下(Vm=+40mV),正常妊娠組BKCa通道開(kāi)放概率( Open Probability , NPO) 為 0.007±0.0017、電流幅值(amplitude o

6、f current,Amp)為7.627±0.727 pA、平均開(kāi)放時(shí)間(the mean open time,TO)為7.216±1.003 ms、平均關(guān)閉時(shí)間(the mean close time, Tc )為 879.445±149.716 ms；重度子癇前期組 BKCa 通道開(kāi)放概率為0.0017±0.0005、電流幅值為4.399±0.464 pA、平均開(kāi)放時(shí)間為1.642±0.348 ms、平均關(guān)閉時(shí)間為930.791±2

7、64.157 ms。兩組BKCa通道開(kāi)放概率、電流幅值、平均開(kāi)放時(shí)間比較,差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),而B(niǎo)KCa通道平均關(guān)閉時(shí)間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.6398)結(jié)論：1.本實(shí)驗(yàn)采用兩步法急性酶分離妊娠期子宮小動(dòng)脈,可得適用于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的平滑肌細(xì)胞。2.分離出的子宮小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞單通道電流為 BKCa單通道電流,具有電導(dǎo)值大、鈣依賴和電壓依賴等特性。3. 在細(xì)胞貼附式膜片上,重度子癇前期患者較正常妊娠足月孕婦的子宮小