尿毒癥對大鼠主動脈平滑肌細胞大電導鈣激活鉀通道的影響.pdf

1、背景：目前尿毒癥發(fā)病率居高不下，大血管的病變已成為致死致殘的一個重要并發(fā)癥，但其機制尚不清楚，可能與離子通道信號轉(zhuǎn)導異常有關。大電導鈣激活鉀通道（BK通道）在血管平滑肌細胞上表達豐富，對維持血管平滑肌細胞的膜電位及血管收縮和舒張的動態(tài)平衡具有重要的調(diào)節(jié)作用。尿毒癥時血管重構可能與BK通道功能異常有關。
　　目的：探討尿毒癥對大動脈平滑肌細胞BK通道的影響，闡述尿毒癥大動脈損傷的分子機制。
　　方法：
　?。?）將各項檢

2、測基線值無顯著差異的大鼠隨機分為兩組，尿毒癥模型組采用5/6腎大部分切除法，對照組行假手術只分離腎被膜。兩組大鼠均于術前和術后2、8、16、24、30、36周時化驗血清尿素氮（BUN）、肌酐（Scr），以判斷大鼠模型是否建立成功，并測量鼠尾動脈收縮壓（SBP）觀察模型組大鼠血壓的動態(tài)變化。模型構建成功后，兩組大鼠左側(cè)腎臟組織及胸腹主動脈下端進行蘇木精-伊紅(HE)染色法和或馬松三色染色法（Masson）染色處理后用于病理分析，觀察腎臟和

3、血管結構的病理改變。
　?。?）急性酶消化法分離大鼠胸腹主動脈得到單個平滑肌細胞后，全細胞膜片鉗實驗技術記錄平滑肌細胞 BK通道電流。
　?。?）采用實時熒光定量PCR技術（QPCR）和Western blot技術測定大鼠胸腹主動脈平滑肌細胞BK通道亞單位的mRNA和蛋白的相對表達量。
　　結果：
　?。?）動物模型的驗證：①腎功能：與對照組相比，模型組大鼠至少從術后第2周開始出現(xiàn)血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN

4、）升高，在36周時血肌酐值為（102.67±3.28）μmol/L，血尿素氮高達（24.78±5.14）mmol/L，符合造模要求。②腎臟病理變化：模型組殘腎體積增大，形狀不規(guī)則，鏡下殘腎可見腎小管及間質(zhì)炎性細胞浸潤，腎小管萎縮斷裂擴張，腎小球硬化，腎間質(zhì)纖維化。③血管病理改變：模型組大鼠主動脈壁局部增厚，平滑肌細胞增生。④SBP變化：術前兩組大鼠血壓無明顯差異，模型組大鼠（n=15）SBP至少從術后第2周開始顯著升高，第2周時對照組大

5、鼠（n=12）血壓為（113.5±3.6）mmHg，模型組大鼠血壓為（128.7±5.4）mmHg，兩組相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；且隨術后時間的延長，模型組血壓逐步升高，在術后第8、16、24、30、36周時模型組血壓值分別為（141.2±4.8）mmHg、（153.9±7.4）mmHg、（163.5±6.7） mmHg、(174.2±6.6) mmHg、（181.3±7.7）mmHg，和對照組比較后差異有統(tǒng)計學意義（P<0

6、.05）；
　　（2）主動脈平滑肌細胞BK通道電流變化：當刺激電壓>10mV時，模型組主動脈平滑肌細胞BK通道電流密度較對照組明顯降低（P<0.05），在刺激電壓為+70mV時，電流密度分別為（199±17）pA／pF和（85±13）pA／pF（n=6）；
　?。?）BKα亞基和β1亞基mRNA的表達：應用2-ΔΔCt的計算方法，將對照組大鼠目的基因2-ΔΔCt值設定為對照值1，得出模型組大鼠的BKα亞基和BKβ1亞基mRN

7、A的表達均較對照組明顯降低（P<0.05）；
　?。?）BKα亞基和β1亞基蛋白的表達：使用內(nèi)參β-actin標準化，Western Blot檢測發(fā)現(xiàn)模型組BK通道α亞基和βl亞基蛋白表達與mRNA表達趨勢一致，均較對照組低（P<0.05）。
　　結論：
　　（1）5/6腎切除可以引起腎形態(tài)學和功能上的改變，而且腎臟的損傷可進一步導致系統(tǒng)性動脈高血壓，左心室肥厚，主動脈重構，說明該模型適用于尿毒癥及其心血管病并發(fā)癥的研