動(dòng)脈粥樣硬化兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鈣激活鉀通道活性的變化及前列腺素E-,1-對(duì)其影響的研究.pdf

1、目的：動(dòng)脈粥樣硬化（AS）的形成機(jī)制和病理生理過(guò)程十分復(fù)雜。目前認(rèn)為AS，尤其是粥樣斑塊形成時(shí)，血管通常以重塑（remodeling）機(jī)制發(fā)生代償性擴(kuò)張，但代償性擴(kuò)張的確切機(jī)制尚未完全闡明。血管平滑肌細(xì)胞鈣激活鉀通道（Kca）參與細(xì)胞膜動(dòng)作電位的復(fù)極，對(duì)維持血管張力具有重要的作用。至于AS形成過(guò)程中，血管平滑肌細(xì)胞Kca通道的電生理特性如何變化，鮮見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)利用膜片鉗單通道記錄技術(shù)研究（1）AS兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Kca通道活性的變化

2、，旨在從分子水平上探討AS血管代償性擴(kuò)張的可能機(jī)制和深化對(duì)AS形成的病理生理過(guò)程的認(rèn)識(shí)。（2）前列腺素E1（PGE1）對(duì)Kca通道活動(dòng)的影響，以從分子水平上探討AS時(shí)PGE1的擴(kuò)血管機(jī)制和意義。方法：(1)將20只健康的新西蘭白兔隨機(jī)分為對(duì)照（Control）組和模型（AS）組，每組各10只，雌雄不拘，體重1.0±0.15kg，月齡3–4個(gè)月。(2)AS組喂高脂飼料（0.5％膽固醇+5％豬油+15％蛋黃粉+79.5％普通飼料），3周后去

3、除飼料中的膽固醇，再喂養(yǎng)5周；Control組只喂普通飼料，持續(xù)喂養(yǎng)8周。(3)用酶消化法獲取單個(gè)主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，通過(guò)膜片鉗單通道記錄技術(shù)檢測(cè)AS兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Kca通道的活性。在浴液中分別加入不同濃度的Ca2+（10-8、5×10-8、10-7、5×10-7、10-6M）和PGE1(10-9、5×10-9、10-8、5×10-8、10-7M)，以Pclamp7.0應(yīng)用軟件實(shí)時(shí)采樣記錄通道的開(kāi)放概率（Po）、平均開(kāi)放時(shí)間（To）、

4、平均關(guān)閉時(shí)間（Tc）和電流幅值（Am），以藥前作對(duì)照觀察上述參數(shù)的變化。結(jié)果：(1)Kca通道的活性：在細(xì)胞吸附式膜片（cell–attached patch）和內(nèi)面向外式膜片（inside–outside patch）下，Control組和AS組Kca通道的開(kāi)放均具有明顯的電壓依賴(lài)性。與Control組比較，AS組Kca通道的活性明顯增加。在對(duì)稱(chēng)性高鉀溶液中，當(dāng)膜電位鉗制為+40mV時(shí)，利用cell–attached patch觀察，

5、Control組和AS組Po分別為0.0316±0.0205和0.2401±0.1215(P<0.05)(n=10)，Tc為238.752±203.253ms和19.861±12.524ms(P<0.001)(n=10)，電導(dǎo)為205.650±37.125pS和195.225±42.825pS(P＞0.05)(n=10)，To和Am變化均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)(n=10)。在inside–outside patch下，Contro

6、l組和AS組Po分別為0.0183±0.0085和0.1652±0.0764(P<0.01)(n=10)，Tc為432.147±192.637ms和52.193±19.880ms(P<0.001)(n=10)，To為6.635±2.523ms和8.0296±2.153ms(P<0.05)(n=10)，電導(dǎo)為258.850±15.475pS和262.025±63.450pS(P＞0.05)(n=10)，Am變化均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05

7、)(n=10)。(2)Kca通道的鈣敏感性：利用inside–outside patch觀察，Control組和AS組Kca通道均具有明顯的鈣敏感性，并呈濃度依賴(lài)性。但與Control組比較，AS組的鈣敏感性下降。在對(duì)稱(chēng)性高鉀溶液中，當(dāng)膜電位鉗制為+40mV時(shí)，在浴液中加入不同濃度的Ca2+（10-8、5×10-8、10-7、5×10-7、10-6M），Control組Po由加Ca2+前0.0183±0.0085分別增加到0.0219±

8、0.0108(P＞0.05)、0.0465±0.0190(P＞0.05)、0.1002±0.0240(P<0.05)、0.1605±0.0651(P<0.01)和0.3901±0.0812(P<0.01)(n=10)，AS組Po由加Ca2+前0.1652±0.0764分別增加到0.1901±0.0807(P＞0.05)、0.3520±0.0686(P＞0.05)、0.6014±0.0471(P<0.05)、0.7081±0.0338(P

9、<0.01)和0.8421±0.0318(P<0.01)(n=10)。與加Ca2+前比較，Control組Po增加了22.3509±9.4338倍，而AS組僅增加了5.3111±0.4180倍(P<0.01)。(3) PGE1對(duì)Kca通道活動(dòng)的影響：在inside-outside patch下，PGE1可明顯激活Control組和AS組Kca通道，并具有濃度依賴(lài)性。但AS組對(duì)PGE1的反應(yīng)性低于Control組。在對(duì)稱(chēng)性高鉀溶液中，當(dāng)膜

10、電位鉗制為+40mV時(shí)，在浴液中加入不同濃度的PGE1（10-9、5×10-9、10-8、5×10-8、10-7M），Control組Po由加藥前0.0183±0.0085分別增加到0.0188±0.0069(P＞0.05)、0.0450±0.0119(P<0.05)、0.0563±0.0155(P<0.01)、0.1118±0.0315(P<0.01)和0.2533±0.0569(P<0.001)(n=10)，AS組Po由加藥前0.1

11、652±0.0764分別增加到0.1830±0.0617(P＞0.05)、0.3247±0.1326(P<0.05)、0.5244±0.1614(P<0.01)、0.6798±0.1817(P<0.01)和0.8056±0.1937(P<0.001)(n=10)。與加藥前比較，Control組Po增加了14.8129±3.4079倍，而AS組僅增加了5.1443±2.8612倍(P<0.01)。結(jié)論：(1)AS血管平滑肌細(xì)胞Kca通道的