前列腺素E1對(duì)免動(dòng)脈粥樣硬化損斑塊的穩(wěn)定作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　 動(dòng)脈粥樣硬化(AS)易損斑塊破裂及繼發(fā)血栓形成，造成血管閉塞，引起大量的心腦血管臨床事件，因此，穩(wěn)定易損斑塊對(duì)于治療AS疾病意義重大。易損斑塊具有薄的纖維帽，大的脂質(zhì)核心以及大量炎癥細(xì)胞浸潤等明顯特征。其中，氧化應(yīng)激引起的炎癥反應(yīng)是造成斑塊易損性增加，易于破裂的關(guān)鍵性因素。研究表明，他汀類藥物除了明顯的降脂作用之外，還存在顯著的抗氧化應(yīng)激和抑制炎癥反應(yīng)等多效性作用，是臨床治療AS的有效藥物之一，然而此類藥物存在的不

2、良反應(yīng)使其臨床應(yīng)用受到一定程度的限制。前列腺素E1(PGE1)是一種高效、安全的生物活性物質(zhì)，具有舒張血管、抑制血小板聚集、降低血液黏度等作用，因此臨床用于治療動(dòng)脈硬化性閉塞癥。近年的研究發(fā)現(xiàn)，PGE1具有顯著的抗氧化應(yīng)激和抑制炎癥反應(yīng)等作用。然而，PGE1是否能夠穩(wěn)定AS斑塊，目前缺乏直接的證據(jù)。因此，本研究擬在兔動(dòng)脈粥樣硬化模型中研究PGE1對(duì)于易損斑塊的作用，并且初步探討其作用機(jī)制。
　　 目的：
　　 (1)建立

3、動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊的動(dòng)物模型：
　　 (2)選擇辛伐他汀作為陽性對(duì)照藥物，研究PGE1對(duì)易損斑塊的療效及其量效關(guān)系；
　　 (3)初步探討PGE1對(duì)易損斑塊的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 1．易損斑塊模型的建立：50只2月齡雄性新西蘭大白兔，高脂喂養(yǎng)(1％膽固醇)喂養(yǎng)2周后，進(jìn)行腹主動(dòng)脈球囊損傷術(shù)，術(shù)后繼續(xù)高脂喂養(yǎng)至9周末，隨機(jī)分為五組，分別為模型組、低劑量PGE1組(0.3μg·kg-1·day-1

4、)、中劑量PGE1組（0.6μg·kg-1·day-1）、高劑量PGE1組（1.2μg·kg-1·day-1）和辛伐他汀組（5mg·kg-1·day-1），同時(shí)改為普通飲食，13周末所有兔進(jìn)行藥物觸發(fā)，處死兔后進(jìn)行病理研究。
　　 2．體重檢測：分別在實(shí)驗(yàn)開始、9周末和13周末，對(duì)所有兔稱量體重。
　　 3．血液生化指標(biāo)檢測：分別在實(shí)驗(yàn)開始、9周末和13周末，經(jīng)耳緣靜脈采血，留取血清測定總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)

5、、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)以及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的水平。
　　 4．組織病理學(xué)檢測：留取腹主動(dòng)脈標(biāo)本，觀察斑塊和血栓形成的分布狀況。利用HE染色，觀察斑塊形態(tài)學(xué)特征，測量斑塊纖維帽厚度、血管內(nèi)-中膜厚度，并計(jì)算纖維帽厚度／血管內(nèi)-中膜厚度的比值。
　　 5．易損指數(shù)：分別利用油紅O和天狼猩紅染色觀察斑塊內(nèi)脂質(zhì)和膠原的分布狀況。應(yīng)用RAM-11及α-actin抗體分別測定斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞的分

6、布情況。巨噬細(xì)胞、脂質(zhì)、平滑肌細(xì)胞以及膠原的含量表示為染色陽性區(qū)域占斑塊面積的百分?jǐn)?shù)，易損指數(shù)=(RAM11十油紅O)染色陽性百分比/(α-actin+天狼猩紅)染色陽性百分比的比值。
　　 6．免疫組織化學(xué)染色：應(yīng)用單克隆抗體，對(duì)斑塊內(nèi)的MMP-1和MMP-9進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。
　　 7．逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)：檢測血管組織MCP-1，MMP-1以及MMP-9的mRNA的表達(dá)水平。
　　 8．

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料應(yīng)用(x)±s表示。并用one-sample Kolmogorov-Smirnov test評(píng)價(jià)定量資料是否呈正態(tài)分布。連續(xù)性變量兩組間比較用非配對(duì)t-檢驗(yàn)，多組間比較用單因素方差分析。P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果：
　　 1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況：共有7只兔未完成實(shí)驗(yàn)，2只死于麻醉意外，3只死于腹瀉，2只死于呼吸道感染。13周末各組兔的存活情況

8、為：模型組9只，小劑量PGE1組8只，中劑量PGE1組9只，高劑量PGE1組9只，辛伐他汀組8只。
　　 2．各組兔體重：與基礎(chǔ)狀態(tài)比較，9周末與13周末兔體重顯著增加(p＜0.01)，9周末與13周末兔體重比較無顯著差異。各時(shí)段組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3．血脂水平：與基礎(chǔ)狀態(tài)比較，9周末兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C均顯著增高(p＜0.01);13周末，各治療組血脂水平與模型組比較，PGE1各組對(duì)血

9、脂影響未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，辛伐他汀組TC、TG、LDL-C均顯著降低(p＜0.01)，而HDL-C顯著升高(p＜0.05);PGE1三組間比較無顯著性差異。
　　 4．病理學(xué)檢測：五組兔腹主動(dòng)脈內(nèi)膜均見淺黃色斑塊樣突起，散在或融合成片，與模型組比較，各治療組斑塊大小和厚度均減小。模型組可見斑塊破裂處附著血栓，說明本實(shí)驗(yàn)成功的建立了易損斑塊兔模型。
　　 病理學(xué)測量結(jié)果顯示，與模型組比較，各治療組斑塊纖維帽厚度均明顯增加(P

10、＜0.01)，其中PGE1中劑量組與辛伐他汀組纖維帽厚度無差異，而PGE1高劑量組纖維帽厚度卻顯著高于辛伐他汀組(P＜0.05)；與模型組比較，各治療組內(nèi)-中膜厚度顯著減少(P＜0.01)，結(jié)果纖維帽厚度／內(nèi)-中膜厚度的比值明顯升高(P＜0.01～0.05)，高劑量PGE1與辛伐他汀作用類似；PGE1三個(gè)劑量組間具有劑量依賴性。
　　 5．易損指數(shù)：與模型組比較，各治療組斑塊中巨噬細(xì)胞和脂質(zhì)的含量顯著降低，平滑肌細(xì)胞和膠原的含量

11、明顯升高，結(jié)果斑塊的易損指數(shù)顯著降低(P＜0.01)；高劑量PGE1的作用強(qiáng)于辛伐他汀(P＜0.01)，且PGE1各治療組間具有劑量依賴性。PGE1高劑量在降低巨噬細(xì)胞含量，增加平滑肌細(xì)胞和膠原含量方面，作用尤為顯著(P＜0.01)。
　　 6．免疫組織化學(xué)染色：與模型組比較，各治療組斑塊中MMP-1和MMP-9的表達(dá)量均顯著減少(P＜0.01)；高劑量PGE1降低二者表達(dá)的作用顯著強(qiáng)于辛伐他汀(P＜0.01～0.05)，且PG

12、E1三個(gè)劑量組間具有劑量依賴性。
　　 7.RT-PCR:與模型組比較，各治療組MCP-1、MMP-1、MMP-9mRNA表達(dá)明顯減少(P＜0.01)；高劑量PGE1的作用最為顯著(P＜0.01～0.05)，PGE1三個(gè)劑量組間具有劑量依賴性。
　　 結(jié)論：
　　 1．通過高脂飲食、內(nèi)皮損傷以及藥物觸發(fā)的方法可建立易損斑塊動(dòng)物模型，具有與人類AS病變類似、建模時(shí)間短、適于藥物干預(yù)的特征。
　　 2．低、中