PPAR-γ對大鼠腎缺血再灌注損傷后腎小管上皮細胞自噬的調(diào)控作用.pdf

1、目的：
　　探討PPAR-γ激活對大鼠腎缺血再灌注損傷后腎小管上皮細胞自噬活性調(diào)控作用。
　　方法：
　　選用SPF級SD雄性大鼠，200-250g，將大鼠分為5組。sham組:僅打開腹腔但不阻斷雙側(cè)腎蒂血管，觀察45min后關閉腹腔，于術前1周給予2ml/(kg?d) DMSO灌胃；DMSO+IRI組（DIR組）：用微型血管夾阻斷大鼠雙側(cè)腎蒂血管，45min后松開微型血管夾恢復雙腎血流，關閉腹腔，于術前1周給予2ml

2、/(kg?d) DMSO灌胃；吡格列酮+IRI組（PIR組）：用微型血管夾阻斷大鼠雙側(cè)腎蒂血管，45min后松開微型血管夾恢復雙腎血流，關閉腹腔，于術前1周給予10mg/(kg?d) Pio灌胃；GW9662+IRI組（GIR組）：用微型血管阻斷大鼠雙側(cè)腎蒂血管，45min后松開微型血管夾恢復雙腎血流，關閉腹腔，于術前24h和12h各于腹腔內(nèi)注射1mg/kg GW9662；吡格列酮+GW9662+IRI組（PGIR組）：用微型血管夾阻斷

3、大鼠雙側(cè)腎蒂血管，45min后松開微型血管夾恢復雙腎血流，關閉腹腔，于術前1周給予10mg/(kg?d) Pio灌胃，同時于術前24h和12h各于腹腔內(nèi)注射1mg/kg GW9662，（n=5）。各組大鼠于術后24h采血和收取大鼠腎臟標本，收集大鼠血液用于檢測血清肌酐、血尿素氮來判斷腎功能，從大鼠腹部切口獲取雙側(cè)腎臟，行HE染色，在光學顯微鏡下觀察大鼠腎臟病理變化，TUNEL法檢測各組大鼠腎臟腎小管上皮細胞的凋亡情況，利用RT-PCR及

4、Western-blot方法，檢測腎臟中PPAR-γ的mRNA和蛋白的表達，應用蛋白免疫印跡法（western blot）檢測各組大鼠自噬溶酶體相關蛋白LC3和Beclin-1表達變化。
　　結(jié)果：
　?。?）血清肌酐、血尿素氮：與sham組相比，其余各組IRI組SCr、BUN均顯著升高（P<0.05）。與DIR組相比，PIR組中SCr、BUN降低（P<0.05）， GIR組SCr、BUN變化無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；與

5、PIR組比較，PGIR組SCr、BUN升高（P<0.05）。
　?。?）HE染色：與sham組相比，其余各組IRI腎組織病理評分明顯升高（P<0.05）；與DIR組相比，PIR組病理評分明顯降低（P<0.05），GIR組病理評分無明顯差異（P>0.05）；與PIR組相比，PGIR組病理評分上升（P<0.05）。
　?。?）腎小管上皮細胞凋亡的狀況：與sham組比較，其余各組IRI組細胞凋亡數(shù)明顯增加（P<0.05）；與DIR

6、組相比，PIR組細胞凋亡數(shù)顯著降低（P<0.05）， GIR組細胞凋亡數(shù)無明顯差異（P>0.05）；與PIR組相比，PGIR組細胞凋亡數(shù)顯著增加（P<0.05）。
　?。?）PPAR-γPCR表達：與sham組相比，PIR組、PGIR組的PPAR-γ的表達明顯增強（P<0.05），DIR組的PPAR-γ的表達無統(tǒng)計學意義（P>0.05），GIR組的PPAR-γ的表達降低（P<0.05）；與DIR相比，PIR組PPAR-γ表達顯著增

7、強（P<0.05）；與PIR組相比，PGIR組PPAR-γ表達顯著降低（P<0.05）。
　?。?）PPAR-γ、LC3和Beclin-1蛋白表達：與sham組相比，其余各組IRI組LC3和Beclin-1表達均顯著增強（P<0.05），而DIR組PPARγ表達變化無統(tǒng)計學意義（P>0.05），PIR組、PGIR組PPARγ表達顯著增強（P<0.05），GIR組PPARγ表達顯著降低（P<0.05）；與DIR組相比，PIR組PPA