老年大鼠腎臟缺血-再灌注損傷誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的變化特點(diǎn)及機(jī)制研究.pdf

1、腎臟缺血是急性腎功能衰竭的常見原因，老年人對(duì)其易感性增加，但機(jī)制尚不清楚。腎缺血導(dǎo)致急性腎衰的原因是缺血/再灌注損傷，腎小管上皮細(xì)胞凋亡是其重要發(fā)生機(jī)制之一。機(jī)體衰老進(jìn)程中也存在著細(xì)胞凋亡的失調(diào)，在生理狀態(tài)下腎小管上皮細(xì)胞凋亡隨增齡增加。但腎臟缺血/再灌注損傷時(shí)老年腎小管上皮細(xì)胞凋亡是否也更加明顯，以及細(xì)胞凋亡在老年缺血性急性腎衰中的作用尚無報(bào)道。目的：觀察老年大鼠腎臟缺血/再灌注損傷誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的變化特點(diǎn)，及其與腎功能損傷和

2、腎臟病理改變的關(guān)系，探討細(xì)胞凋亡在老年缺血性急性腎衰中的作用；通過對(duì)caspase依賴的內(nèi)源性凋亡(線粒體)途徑和外源性凋亡(死亡受體)途徑的研究以及環(huán)孢霉素A和(CsA)霉酚酸酯(MMF)對(duì)兩條凋亡途徑的干預(yù)，探討老年大鼠腎臟缺血/再灌注損傷誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡變化的機(jī)制。方法：老年(27月齡)和青年(3月齡)雄性wistar大鼠按照隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)的原則分別分為假手術(shù)組、缺血/再灌注損傷模型組、CsA干預(yù)組及MMF干預(yù)組。雙側(cè)腎動(dòng)脈

3、夾閉30min再灌注18h制作大鼠腎臟缺血/再灌注損傷模型。比色法測(cè)定血清肌酐(SCr)濃度；過碘酸-希夫氏堿(PAS)染色觀察腎臟組織病理改變；原位末端標(biāo)記(TUNEL)法及DNA電泳觀察腎小管上皮細(xì)胞凋亡情況；比色法測(cè)定腎組織超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量；Northernblot檢測(cè)腎組織Bax、Bcl-2、Fas、caspase-3mRNA表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)腎組織caspase-8、9mRNA表達(dá)；Wes

4、ternblot檢測(cè)胞漿細(xì)胞色素c、caspase-3、8、9蛋白表達(dá)。結(jié)果：生理狀態(tài)下老年大鼠SCr水平明顯高于青年大鼠，腎組織可以見到病理改變；腎臟缺血/再灌注損傷時(shí)，兩年齡模型組大鼠SCr均明顯升高，腎臟組織病理改變明顯加重，老年鼠的上述變化較青年鼠更為顯著(P＜0.05)；老年假手術(shù)組大鼠腎組織凋亡細(xì)胞數(shù)目明顯多于相應(yīng)青年大鼠(分別為1.53±0.24％和0.99±0.17％，P＜0.05)；兩年齡模型組大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡程

5、度都較相應(yīng)假手術(shù)組明顯加重(P＜0.05)，而老年大鼠的變化較青年大鼠更加明顯(TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)分別增加25.70±4.99倍和19.61±2.15倍，P＜0.05)；腎臟缺血/再灌注損傷時(shí)，老年及青年模型組大鼠腎組織中SOD活性都明顯降低(P＜0.05)，MDA含量都明顯增加(P＜0.05)，同時(shí)線粒體途徑中的相關(guān)物質(zhì)(Bax/Bcl-2、胞漿細(xì)胞色素c、caspase-9)和死亡受體途徑中的相關(guān)物質(zhì)(Fas、caspase-8)

6、，以及兩者共同的下游物質(zhì)caspase-3的表達(dá)都明顯增加(P＜0.05)；相同的損傷條件下，老年大鼠SOD活性、MDA含量的變化，以及Bax/Bcl-2、胞漿細(xì)胞色素c、caspase-9、caspase-3表達(dá)的增加較青年鼠更為明顯(P＜0.05)，而Fas和caspase-8表達(dá)的變化與青年鼠無明顯差異(P＞0.05)。CsA及MMF均能減輕老年及青年大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡(P＜0.05)，但CsA對(duì)老年大鼠的作用較青年鼠更為顯著