雙鏈RNA依賴的蛋白激酶PKR激酶結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)解析及PBK活性位點(diǎn)的初步研究.pdf

1、目的:
　　 RNA依賴性蛋白激酶PKR在先天免疫反應(yīng)、細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞分化、信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞凋亡中起著重要的作用。PKR的激活過(guò)程已經(jīng)被研究了很多年,但是仍然沒有統(tǒng)一的結(jié)論,為了進(jìn)一步認(rèn)識(shí)PKR的激活機(jī)制和亞基識(shí)別機(jī)制,我們進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)。
　　 方法:
　　 應(yīng)用PET-28a載體表達(dá)了不同長(zhǎng)度及突變位點(diǎn)的RNA依賴性蛋白激酶PKR,對(duì)其進(jìn)行純化,并用蛋白結(jié)晶的方法解析了突變形式的PKR激酶結(jié)構(gòu)域PKR-KD的晶

2、體結(jié)構(gòu)(分辨率達(dá)到了2.9(A)),通過(guò)超速離心實(shí)驗(yàn),電荷表面分布圖等方法解釋PKR-KD的二聚體狀態(tài)。
　　 結(jié)果:
　　 解析了突變形式的PKR激酶結(jié)構(gòu)域PKR-KD的晶體結(jié)構(gòu)(分辨率達(dá)到了2.9(A))。PKR-KD的整體結(jié)構(gòu)與前邊他人報(bào)道的是大體一致的,這個(gè)晶體結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)了一種典型的背靠背式二聚體形式和一種新詮釋的面對(duì)面式二聚體形式,通過(guò)超速離心分析實(shí)驗(yàn),電荷表面分布圖以及PKR-KD和eIF2α復(fù)合物的結(jié)構(gòu)模型都