雷公藤紅素對HLA-B27基因啟動子活性影響的研究.pdf

1、目的:
　　通過觀察雷公藤紅素對AS患者外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclearcell，PBMC)活性的影響，檢測不同濃度雷公藤紅素作用下HLA-B27及其啟動子相關激活因子TNF-α，IFN-γ，IL-1β，IL-6表達的變化，為雷公藤治療AS的分子機制提供新的依據(jù)。
　　方法:
　　1、為了研究雷公藤紅素對AS患者PBMC的細胞毒作用，本實驗采用3例確診AS患者外周血，提取PBM

2、C進行細胞培養(yǎng)，24小時后加入不同濃度雷公藤紅素，共同培養(yǎng)48小時后進行Cell Counting Kit-8(CCK-8)檢測，以評估雷公藤紅素對PBMC細胞活性的影響。
　　2、為了證明雷公藤紅素對AS患者PBMC中HLA-B27基因啟動子可能存在抑制作用，本實驗采用10例確診AS患者10ml外周血提取PBMC，24小時后加入不同濃度雷公藤紅素，共同培養(yǎng)48小時后提取RNA，采用Real-time PCR的方法檢測細胞中HLA

3、-B27和TNF-α，IFN-γ，IL-1β及IL-6 mRNA表達變化。同時收集上清液，采用ELISA的方法檢測HLA-B27和TNF-α，IFN-γ，IL-1β，IL-6細胞因子水平變化。
　　結果:
　　1、發(fā)現(xiàn)雷公藤紅素濃度低于1.0μmol/L時，對AS患者PBMC細胞活性無明顯抑制作用(p＞0.05);當濃度高于3.0μmol/L時，雷公藤紅素對PBMC細胞活性呈明顯抑制作用(p＜0.05)。
　　2、發(fā)現(xiàn)

4、AS患者PBMC加藥組與對照組相比，HLA-B27和TNF-α，IFN-γ，IL-1β，IL-6 mRNA量隨雷公藤紅素濃度增高而呈降低趨勢，特別是當雷公藤紅素濃度為1.0μmol/L時，抑制作用最強，其中HLA-B27和TNF-α，IL-1β，IL-6 mRNA表達量的變化具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05); AS患者PBMC加藥組與對照組相比，HLA-B27和TNF-α，IFN-γ，IL-1β，IL-6細胞因子水平呈降低趨勢，同樣當雷公

5、藤紅素濃度為1.0μmol/L時，抑制作用最強，其中TNF-α，IL-1β，IL-6水平的變化具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　結論:
　　1、雷公藤紅素在高濃度時對AS患者PBMC細胞活力有抑制作用，但在一定濃度范圍內(nèi)對PBMC細胞活力無明顯影響，說明在一定濃度范圍內(nèi)雷公藤紅素無明顯細胞毒性。
　　2、雷公藤紅素作用下HLA-B27和TNF-α，IFN-γ，IL-1β，IL-6表達均降低，提示雷公藤紅素可能通過抑