乙酰膽堿酯酶抑制劑對對乙酰氨基酚所致肝損傷的影響及其機(jī)制.pdf

1、本課題通過研究乙酰膽堿酯酶抑制劑（AChEI）對對乙酰氨基酚（APAP）所致肝損傷的影響及其機(jī)制，以指導(dǎo)老年癡呆病人合理安全用藥。
　　首先，第一部分研究了AChEI對APAP所致肝損傷的保護(hù)作用的研究：C57BL/6J小鼠按體重隨機(jī)分為對照（CON）組、APAP組、石杉堿甲（Hup A）組、多奈哌齊（Don）組、利凡斯的明（Riv）組、APAP+Hup A組、APAP+Don組、APAP+Riv組，每組10只。CON組和APAP

2、組給予0.5％羧甲基纖維素鈉；其他各組分別給予Hup A（0.2 mg/kg）、Don（4 mg/kg）、Riv（2 mg/kg）；連續(xù)給藥4天，末次給藥前12 h禁食，末次給藥后2 h，CON組、Hup A組、Don組及Riv組動物腹腔注射生理鹽水，其他各組動物腹腔注射APAP（300 mg/kg），8 h后取血，測定全血乙酰膽堿酯酶（AChE）活力及血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活力；取腦，制備勻漿，測定腦組織中A

3、ChE活力；肝臟常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色觀察肝組織病理學(xué)變化。第二部分研究了AChEI對 APAP所致肝損傷保護(hù)作用機(jī)制的研究：①小鼠按體重隨機(jī)分為CON組、Hup A組、Don組、Riv組、新斯的明（Neo）組、APAP組、APAP+Hup A組、APAP+Don組、APAP+Riv組、APAP+Neo組，每組10只。CON組和APAP組給予0.5%羧甲基纖維素鈉；其他各組分別給予Hup A（0.2 mg/kg）、Don（4 mg

4、/kg）、Riv（2 mg/kg）、Neo（0.15 mg/kg）；連續(xù)給藥4天，末次給藥前12 h禁食，末次給藥后2 h，CON組、Hup A組、Don組、Riv組、Neo組動物腹腔注射生理鹽水，其他各組動物腹腔注射APAP（300 mg/kg），8 h后取血，測定全血 AChE活力及血清中ALT、AST活力；取腦，制備勻漿，測定腦組織中AChE活力；肝臟常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色觀察肝組織病理學(xué)變化。②方法1中，取各組小鼠肝臟制備

5、勻漿，檢測肝臟內(nèi)GSH的含量；提取肝微粒體，檢測CYP2E1酶的活力。③小鼠按體重隨機(jī)分為CON組、APAP組、Hup A組、Riv組、阿托品（Atr）組、美加明（Mec）組、甲基牛扁亭（MLA）組、Atr+Hup A組、Atr+Riv組、Mec+Hup A組、Mec+Riv組、MLA+Hup A組、MLA+Riv組，每組10只，連續(xù)給藥4天，末次給藥前12 h禁食，末次給藥后2 h，CON組動物腹腔注射生理鹽水，其他各組腹腔注射APA

6、P300 mg/kg，8 h后處理各組動物。測定小鼠血清ALT和AST活力；肝臟常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色觀察肝組織病理學(xué)變化。檢測肝組織線粒體中ATP含量、ROS含量、細(xì)胞色素C的濃度；測定肝臟內(nèi)TNF-α及IL-6的mRNA表達(dá)水平及蛋白含量，檢測線粒體中HMGB1的濃度和JNK2的磷酸化。
　　第一部分實(shí)驗結(jié)果顯示，與CON組相比，APAP組血清ALT（p<0.01）、AST（p<0.05）活力顯著升高，圍繞中央靜脈可見大

7、片肝細(xì)胞壞死；與APAP組相比，APAP+Hup A組、APAP+Don組、APAP+Riv組小鼠腦組織內(nèi)AChE活力及血清ALT、AST活力顯著降低（p<0.05），肝細(xì)胞壞死明顯減少。第二部分結(jié)果顯示，①與CON組相比，APAP組小鼠血清ALT、AST活力顯著升高（p<0.01），圍繞肝臟中央靜脈可見大片細(xì)胞壞死；與APAP組相比，APAP+Neo組小鼠全血AChE活力顯著降低（p<0.01），腦內(nèi)AChE活力無顯著變化，血清ALT

8、、AST活力未見顯著變化，組織病理學(xué)結(jié)果仍可見大片壞死肝細(xì)胞。②與 CON組相比，APAP組小鼠肝臟GSH的含量顯著減少（p<0.01）；與APAP組相比，APAP+Hup A組、APAP+Don組、APAP+Riv組小鼠肝臟內(nèi)GSH的含量均未見顯著性差異。各組間肝臟CYP2E1的酶活性也無顯著變化。③與CON組相比，APAP組小鼠血清ALT、AST活力顯著升高（p<0.01）；圍繞中央靜脈以及中央靜脈連接間肝細(xì)胞成片壞死；肝臟線粒體內(nèi)

9、ATP含量和細(xì)胞色素C含量顯著減少，ROS的濃度顯著升高（p<0.05）；肝臟TNF-α、IL-6的mRNA表達(dá)水平及蛋白含量及線粒體中HMGB1的濃度顯著升高（p<0.05），磷酸化JNK2顯著增加（p<0.05）。與APAP組相比，Hup A組、Riv組小鼠血清ALT、AST活力顯著降低（p<0.05），肝細(xì)胞壞死減輕；肝臟線粒體內(nèi)ATP含量和細(xì)胞色素C含量顯著增加，ROS的濃度顯著降低（p<0.05）；肝臟TNF-α、IL-6的m

10、RNA表達(dá)水平及蛋白含量及線粒體中HMGB1的濃度顯著降低（p<0.05），磷酸化JNK2顯著減少（p<0.05）。與Hup A組或Riv組相比，Atr+Hup A組或Atr+Riv組小鼠肝臟線粒體內(nèi)ATP含量和細(xì)胞色素C含量顯著減少，ROS的濃度顯著升高（p<0.05）；MLA+Hup A組或MLA+Riv組小鼠肝臟TNF-α、IL-6的mRNA表達(dá)水平及蛋白含量及線粒體中HMGB1的濃度顯著升高（p<0.05），磷酸化JNK2顯著增