鼻嗅御感方對FM1-6-E2流感病毒的防護及其免疫調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、研究目的:通過動物實驗及體外抗病毒實驗，觀察鼻嗅御感方對FM1-6-E2流感病毒的防護作用，并通過檢測其對流感模型小鼠全身免疫及局部黏膜免疫功能的影響，探討其防治流感的可能作用機制，以期為臨床流感防控提供一種便捷、有效的藥物，并闡釋其部分科學原理。
　　研究方法:(1)鼻嗅御感方體外抗FM1-6-E2流感病毒效果觀察:分別將狗腎傳代細胞(Madin-Daby canine kidney cells，MDCK)進行先給藥后感染處理及

2、藥物病毒混合后再感染處理，通過CCK-8法檢測細胞增殖情況，觀察鼻嗅御感方對流感病毒的預防作用及直接滅活作用。(2)鼻嗅御感方體內(nèi)防治流感效果觀察:將BABL/c小鼠隨機分為5組，即空白對照組、模型組、中藥低劑量組、中藥高劑量組及金剛烷胺組。各組小鼠連續(xù)給藥/生理鹽水7d，第8天，除空白對照組外全部小鼠滴鼻感染FM1-6-E2流感病毒液，造模2h后，各組小鼠繼續(xù)給藥/生理鹽水7d。觀察小鼠染毒后的行為改變，觀察并記錄各組小鼠染毒后7d的

3、體重情況，染毒后10d的生存情況。計算各組小鼠染毒7d后的體質(zhì)量變化，染毒10d后的死亡率、死亡保護率及中位生存時間。(3)鼻嗅御感方對流感模型小鼠免疫功能的影響:將BABL/c小鼠隨機分為5組（分組、用藥及造模方法同前）。分別于病毒感染前及染毒3d、7d后取血，流式法檢測血清CD3、CD4、CD8含量及NK細胞殺傷活性，ELISA法檢測血清分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A，SIg-A)、γ-干擾

4、素(Interferon-γ，IFN-γ）含量;頸椎脫臼法處死小鼠，稱重測定肺指數(shù)、脾指數(shù)及胸腺指數(shù)，流式法檢測脾組織CD3、CD4、CD8含量及NK細胞殺傷活性;收集呼吸道分泌物，ELISA法檢測SIg-A含量。
　　研究結(jié)果:(1)鼻嗅御感方體外抗FM1-6-E2流感病毒效果觀察:與模型組比較，8％濃度鼻嗅御感中藥揮發(fā)油預防給藥，可以明顯提高病毒液攻擊下MDCK細胞的OD值（P＜0.001），1％、2％、4％濃度中藥揮發(fā)油及陽

5、性對照藥物金剛烷胺的作用并不明顯;與模型組比較，鼻嗅御感中藥揮發(fā)油及金剛烷胺與病毒液混合后再攻擊MDCK細胞，均能顯著提高病毒抑制率(P＜0.001)。(2)鼻嗅御感方體內(nèi)防治流感效果觀察:小鼠于病毒感染2d后陸續(xù)發(fā)病，與模型組比較，高劑量鼻嗅御感方及金剛烷胺均能改善流感模型小鼠的精神、行為、飲食及體質(zhì)量降低情況（P＜0.001，P=0.001）;鼻嗅御感方能顯著降低染毒小鼠的死亡率，延長中位生存時間(P=0.006)。(3)鼻嗅御感方

6、對流感模型小鼠免疫功能的影響:預防給藥7d后，與模型組比較，中藥高劑量組及金剛烷胺組小鼠胸腺指數(shù)明顯提高;小鼠血清NK細胞殺傷活性明顯增強，血清CD3、SIg-A及INF-γ含量均顯著升高;小鼠脾組織NK細胞殺傷活性、CD3含量、CD4/CD8比值均顯著升高;小鼠呼吸道SIg-A分泌顯著升高。病毒感染3d、7d后，與模型組比較，中藥高劑量組及金剛烷胺組小鼠肺指數(shù)降低，胸腺指數(shù)升高;小鼠血清NK細胞殺傷活性明顯增強，血清CD3、SIg-A