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文檔簡介
1、本文主要從以下幾個部分進行論述:
第一部分 乙醇對小腦皮層浦肯野細胞自發(fā)性復雜鋒電位活動的影響
目的:
在離體條件下,小腦浦肯野細胞對乙醇敏感,可表現(xiàn)為簡單鋒電位(SS)放電頻率的改變。然而,乙醇對活體動物小腦浦肯野細胞自發(fā)性復雜鋒電位(CS)的影響機制還不清楚。因此,本研究擬應用在體膜片鉗記錄結合藥理學手段研究乙醇對烏拉坦麻醉小鼠小腦浦肯野細胞自發(fā)性CS的影響機制。
方法:
成年ICR
2、小鼠(6-8周齡)通過腹腔注射烏拉坦麻醉后,行氣管插管后將動物固定在自制的腦立體定位儀上,在小腦VermisⅥ-Ⅶ區(qū)相對應處行開顱手術,鉆一個直徑約為1-1.5mm小孔,暴露記錄部位的小腦表面,用蠕動泵在腦表面持續(xù)灌流含氧的人工腦脊液(ACSF)。浦肯野細胞貼附式和在體全細胞膜片鉗記錄使用Axopatch-200B放大器.浦肯野細胞自發(fā)性活動的全細胞記錄數(shù)據(jù)通過D/A轉換器1440、Clampex10.3軟件和計算機獲取。記錄電極內填充
3、電極內液,填充后阻抗為4-6MΩ。在軟腦膜下方150-200微米處實施浦肯野細胞全細胞記錄,浦肯野細胞的認定是通過其規(guī)律的SS放電伴隨有不規(guī)律CS放電特征來判斷的,并通過生物素染色來確定。電生理學數(shù)據(jù)分析采用Clampfit10.3軟件,所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準誤表示,并應用SPSS17.0軟件進行單因素方差分析,P<0.05被認為實驗組之間有顯著性差異。
結果:
(1)電流鉗記錄模式下,腦表面灌流乙醇(300 mM)
4、對浦肯野細胞自發(fā)性CS頻率沒有顯著影響,明顯降低自發(fā)性CS引起的SS放電暫停時間并降低CS的AHP振幅。
(2)電壓鉗記錄模式下,乙醇(300 mM)的使用顯著抑制浦肯野細胞自發(fā)性CS波型,表現(xiàn)為波形下面積(AUC)的減少和放電小穗數(shù)量的減少,但不改變CS自發(fā)性活動頻率及其小穗即時頻率。
(3)乙醇導致的浦肯野細胞自發(fā)性CS波形AUC的減少具有劑量依存性,半數(shù)抑制劑量為168.5 mM。
(4)阻斷NMDA
5、和mGluR1受體降低自發(fā)性CS小穗數(shù)量和AUC,但不能阻斷乙醇對CS的抑制作用。
(5) CB1受體阻斷劑,AM251可以阻止乙醇對CS誘發(fā)SS放電暫停、AHP振幅、小穗數(shù)量和AUC的抑制作用。此外,應用CB1受體激動劑,WIN55212-2可顯著抑制CS的小穗數(shù)量、AUC、CS誘發(fā)SS放電暫停和AHP振幅。
結論:
(1)本研究表明乙醇通過活化CB1受體導致小鼠小腦浦肯野細胞自發(fā)性CS活動抑制,提示過量
6、飲酒可能通過活化CB1受體抑制外周感覺信息向小腦皮層浦肯野細胞的傳遞。
(2)乙醇對自發(fā)性CS活動的影響可能在一定程度上反映急性酒精中毒對小腦皮層感覺信息傳遞的損傷。
第二部分 乙醇對面部感覺刺激誘發(fā)小鼠小腦皮層浦肯野細胞外向電流的影響機制
目的:
急性過量攝入乙醇可引起小腦運動調節(jié)功能障礙甚至共濟失調。我們最近研究發(fā)現(xiàn)乙醇降低感覺刺激誘發(fā)小鼠小腦皮層分子層GABA能抑制性反應,提示乙醇調節(jié)面部感
7、覺刺激在小鼠小腦浦肯野細胞上誘發(fā)的反應。因此,本研究擬應用在體膜片鉗記錄結合藥理學手段研究乙醇對烏拉坦麻醉小鼠小腦浦肯野細胞感覺刺激誘發(fā)外向電流的影響機制。
方法:
成年ICR小鼠(6-8周齡)通過腹腔注射烏拉坦麻醉后,行氣管插管后將動物固定在自制的腦立體定位儀上,在小腦VermisⅥ-Ⅶ區(qū)相對應處行開顱手術,鉆一個直徑約為1-1.5mm小孔,暴露記錄部位的小腦表面,用蠕動泵在腦表面持續(xù)灌流含氧的人工腦脊液(ACSF
8、)。浦肯野細胞貼附式和在體全細胞膜片鉗記錄使用Axopatch-200B放大器.浦肯野細胞自發(fā)性活動的全細胞記錄數(shù)據(jù)通過D/A轉換器1440、Clampex10.3軟件和計算機獲取。記錄電極內填充電極內液,填充后阻抗為4-6MΩ。在軟腦膜下方150-200微米處實施浦肯野細胞全細胞記錄,浦肯野細胞的認定是通過其規(guī)律的SS放電伴隨有不規(guī)律CS放電特征來判斷的,并通過生物素染色來確定。應用壓力噴射系統(tǒng)向同側觸須墊吹風(30 ms,60 ps
9、i)進行面部感覺刺激,吹風刺激由電腦控制并通過Master8和Clamfit10.3軟件與電信號記錄同步。電生理學數(shù)據(jù)分析采用Clampfit10.3軟件,所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準誤表示,并應用SPSS17.0軟件進行單因素方差分析,P<0.05被認為實驗組之間有顯著性差異。
結果:
(1)在電流鉗記錄模式下,吹風刺激小鼠觸須墊可誘發(fā)小腦PC產(chǎn)生抑制性突觸后電位(IPSP),并伴有自發(fā)性SS放電暫停。腦表面灌流乙醇(3
10、00 mM)明顯抑制IPSP和自發(fā)性放電暫停時間。
(2)電壓鉗記錄模式下,乙醇(300 mM)抑制感覺刺激誘發(fā)浦肯野細胞外向電流,導致外向電流振幅降低,半寬值減小,上升時間和延遲時間縮短。
(3)乙醇對感覺刺激誘發(fā)小腦皮層浦肯野細胞外向電流的抑制作用具有劑量依存性,半數(shù)抑制劑量為148.5 mM。
(4)應用CB1受體阻斷劑,AM251和0-2050可以阻斷乙醇對感覺刺激誘發(fā)小腦皮層浦肯野細胞外向電流的抑
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