促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素對(duì)小鼠小腦皮層浦肯野細(xì)胞簡單峰電位活動(dòng)的影響.pdf

1、目的：
　　小腦是哺乳動(dòng)物重要的運(yùn)動(dòng)中樞，外部信息經(jīng)攀爬纖維(Climbing fiber，CF)和苔蘚纖維(Mossy fiber，MF)傳入小腦皮層,經(jīng)精密運(yùn)算后，由浦肯野細(xì)胞(Purkinje cell，PC)發(fā)出各種輸出指令，來完成各種生理活動(dòng)。促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(Corticotropin releasing hormone，CRH)是調(diào)控應(yīng)激反應(yīng)和內(nèi)臟活動(dòng)的一種重要神經(jīng)肽，CRH可通過傳入纖維分布于哺乳動(dòng)物小腦環(huán)

2、路，影響PCs的自發(fā)性放電和指令輸出，但其影響機(jī)制尚不明確。本研究擬采用在體的電生理記錄技術(shù)以及神經(jīng)藥理學(xué)手段，在烏拉坦麻醉的狀態(tài)下，研究不同濃度CRH對(duì)小鼠小腦PC自發(fā)性單純峰電位活動(dòng)的影響，探討CRH對(duì)小腦皮層PC自發(fā)性活動(dòng)影響的受體機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)材料與方法：
　　成年（6-8周齡）ICR小鼠，腹腔注射烏拉坦(1.3 g/kg)麻醉后，于小腦Vermis區(qū)的相應(yīng)部位行一個(gè)直徑為1-1.5 mm的開顱術(shù)，剝除硬腦膜，腦表

3、面的暴露部位持續(xù)給予人工腦脊液(Artificial cerebrospinal fluid，ACSF)灌流。PC自發(fā)性放電活動(dòng)采用細(xì)胞外貼附式記錄記錄方法，通過膜片鉗放大器（Axopatch-200B）及數(shù)據(jù)采集軟件記錄小腦皮層PC自發(fā)性活動(dòng);CRH及受體阻斷劑采用小腦表面灌流給藥;電生理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析采用Clampfit10.3軟件。各組數(shù)據(jù)均用Mean±S.E.M.表示，記錄細(xì)胞數(shù)用n表示,采用SPSS(Version21)軟件進(jìn)行

4、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析，使用單因素方差分析進(jìn)行均數(shù)的比較，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　(1)腦表面灌流CRH，可導(dǎo)致PC自發(fā)性簡單峰電位放電即時(shí)頻率顯著減少，峰值左移;簡單峰電位放電頻率由給藥前的24.3±1.6 Hz降低到19.4±2.1Hz(P＜0.05)，但CRF對(duì)簡單峰電位放電的變異系數(shù)(Coefficient ofvariation，CV)無顯著影響。
　　(2)在GABAA受體阻斷劑存在下，C

5、RH可導(dǎo)致PC自發(fā)性簡單峰電位放電即時(shí)頻率顯著增加，峰值右移。簡單峰電位放電頻率由25.5±1.8Hz升高到30.7±2.4 Hz(P＜0.05)，表明CRF可能興奮小腦皮層抑制性中間神經(jīng)元，導(dǎo)致PC簡單峰電位放電頻率減少;阻斷抑制性中間神經(jīng)元的抑制性傳入后，CRH可興奮PC導(dǎo)致簡單峰電位放電頻率升高。
　　(3)在阻斷抑制性中間神經(jīng)元介導(dǎo)的GABA能突觸傳遞后，CRH對(duì)PC自發(fā)性簡單峰電位放電頻率的升高作用具有濃度依存性，引起P

6、C自發(fā)性簡單峰電位升高的半數(shù)有效濃度是53.8 nM，最大濃度是1μM。
　　(4)阻斷GABAA和AMPA受體，CRH可使PC自發(fā)性簡單峰電位頻率升高，即時(shí)頻率顯著升高，峰值右移;CRH對(duì)PC自發(fā)性簡單峰電位放電CV影響不大，表明CRH興奮PC導(dǎo)致簡單峰電位放電頻率升高不是通過增加CF和PF的興奮性傳入來實(shí)現(xiàn)的。
　　(5)在非選擇性CRH受體阻斷劑存在下，CRH對(duì)PC自發(fā)性簡單峰電位放電即時(shí)頻率影響消失，簡單峰電位平均頻

7、率不再升高，表明CRH通過CRF受體興奮小腦皮層PC，導(dǎo)致PC自發(fā)性簡單峰電位放電頻率升高。
　　(6)在CRH-R2阻斷劑存在下，CRH對(duì)PC自發(fā)性簡單峰電位放電即時(shí)頻率的影響依然存在，簡單峰電位平均頻率顯著升高，表明CRH興奮小腦皮層PC，不依賴于CRH-R2，提示CRH直接作用于PC膜上的CRH-R1而興奮PC導(dǎo)致自發(fā)性簡單峰電位頻率升高。
　　結(jié)論：
　　本研究結(jié)果表明，CRH可興奮小腦皮層抑制性中間神經(jīng)元導(dǎo)致