河蚌多糖的生物學(xué)活性研究.pdf

1、為深入研究淡水貝類活性多糖的生物學(xué)功能和使用價(jià)值，本研究選用淡水河蚌(Anodonta)作為提取多糖的試驗(yàn)原料，主要研究以下四個(gè)部分。 1.河蚌多糖(Anodonta polysaccharides APS)提取工藝條件的優(yōu)化目的：本研究對(duì)河蚌多糖的提取條件進(jìn)行優(yōu)化。方法：選定提取溫度、提取時(shí)間、料液比、提取次數(shù)作為主要影響因素，以總糖含量為指標(biāo)篩選影響河蚌多糖的提取因素。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行三因素三水平的正交試驗(yàn)優(yōu)化提取河蚌

2、多糖工藝條件。結(jié)果：影響總糖得率的因素先后順序?yàn)椋禾崛囟?浸提時(shí)間>料液比。最優(yōu)工藝條件為：浸提時(shí)間2 h、提取溫度為90℃、料液比為1/90。 2.河蚌多糖(APS)的分離純化目的：本研究對(duì)河蚌粗多糖對(duì)進(jìn)行分離和純化。方法：河蚌粗多糖經(jīng)Sevag法去除游離蛋白，透析、冷凍干燥，過(guò)DE-52纖維柱和Sephadex G-200，用UV分光光光度計(jì)掃描，高效液相色譜(HPLC)及示差檢測(cè)器檢測(cè)純度檢測(cè)分離效果。結(jié)果：河蚌粗多糖可

3、分離得APS Ⅰ和．APS Ⅱ兩種多糖，在260 nm和280 nm均無(wú)核酸和蛋白質(zhì)吸收峰；APS Ⅰ為一個(gè)峰，APS Ⅱ?yàn)橐淮蠓搴鸵恍》濉?方法：應(yīng)用高速逆流色譜(HSCCC)對(duì)河蚌粗多糖的純化，結(jié)果：以12.5％聚乙二醇(PEG)1000與16％磷酸鉀緩沖溶液(pH 6.8)組成的水性二相系統(tǒng)，在高速逆流色譜儀上能成功地分離出多糖。 3.河蚌多糖(APS)生物學(xué)功能研究3．1 河蚌多糖(APS)的體外抗氧化作用目的：

4、為研究河蚌多糖的體外抗氧化作用。方法：應(yīng)用河蚌多糖體外對(duì)羥自由基(OH)和超氧陰離子(O<,2>)的清除、抑制H<,2>O<,2>誘導(dǎo)小鼠紅細(xì)胞氧化溶血的影響、抗肝組織自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化作用及總抗氧化能力等方法來(lái)研究河蚌粗多糖抗氧化活性。結(jié)果：河蚌多糖對(duì)氧損傷的抑制作用均表現(xiàn)量效關(guān)系。結(jié)論：河蚌粗多糖具有明顯的體外抗氧化作用。 3．2河蚌多糖(APS)對(duì)羅非魚(yú)免疫功能和抗氧化性能的影響目的：為研究河蚌多糖對(duì)羅非魚(yú)免疫功能及抗氧性能

5、影響。方法：在羅非魚(yú)基礎(chǔ)飼料的基礎(chǔ)上添加河蚌多糖0.5％、1.0％、1.5％和2.0％連續(xù)飼喂21d，分別于第7、14、21 d采血檢測(cè)魚(yú)血清中的免疫指標(biāo)(LYS、AKP、ACP)及肝臟MPO，抗氧化指標(biāo)(MDA、SOD、GSH．PX)．結(jié)果：各添加組的免疫指標(biāo)，抗氧化指標(biāo)與對(duì)照組相比，差異顯著(P<0.05)，而各添加組間的差異不顯著(P>0.05)。結(jié)論：在羅非魚(yú)飼料中添加0.5％-2％的河蚌粗多糖可明顯增強(qiáng)羅非魚(yú)的免疫性能和抗氧化

6、能力。 3．3 APS Ⅰ對(duì)羅非魚(yú)外周血淋巴細(xì)胞增殖的影響目的：為研究純化的河蚌多糖APS Ⅰ生物學(xué)功能。方法：在羅非魚(yú)外周血淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)體系中，添加APS 10.1 mg/mL、1 mg/mL和2 mg/mL，觀察其對(duì)羅非魚(yú)外周血淋巴細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果：河蚌多糖APS Ⅰ添加組的淋巴細(xì)胞增殖的效果與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01)，而添加各濃度間差異不顯著(P>0.05)。結(jié)論：純化的河蚌多糖可極顯著增加羅非魚(yú)外周血

7、淋巴細(xì)胞活性的作用。 4.APS Ⅰ的組成和結(jié)構(gòu)的初步研究目的：為研究APS Ⅰ的組成和結(jié)構(gòu)。方法：通過(guò)薄層層析、元素分析儀、紅外光譜儀、HPⅠC、<,'1>H．NMR及<'13>C．NMR對(duì)APS Ⅰ進(jìn)行分析。結(jié)果：APS Ⅰ僅為葡萄糖組成的，不合N元素和硫酸根離子，C、H含量比值為6:1，糖苷鍵的連接方式主要是D糖苷鍵，同時(shí)存在不同連接方式的α糖苷鍵，可能存在α-GⅠcC1→4)→和β-Glc C1→4)一連接方式。結(jié)論：A