不同方法提制的綠茶多糖理化特性及生物學(xué)活性研究.pdf

1、活性多糖是生物體內(nèi)含量豐富的大分子有機(jī)物，或作為生物體內(nèi)能源和結(jié)構(gòu)物質(zhì)，或參與了各種生理活動(dòng)，也是一類對人體具有廣泛生理調(diào)節(jié)功能的功效成分。茶多糖是茶葉中普遍存在的天然大分子活性物質(zhì)，其全稱為茶葉多糖復(fù)合物(tea polysaccharide conjugates，TPC)，是一種多糖與蛋白質(zhì)結(jié)合的雜聚多糖，具有多方面的生物學(xué)活性如降血糖、免疫調(diào)節(jié)等。迄今，茶多糖的提取純化、理化及功能活性研究已有多年，但是其產(chǎn)品開發(fā)和應(yīng)用非常有限，這

2、與其在茶葉中的含量低、成分復(fù)雜、分離純化難度大、缺乏系統(tǒng)性的質(zhì)量指標(biāo)以及降血糖等功效活性評價(jià)模型單一等有關(guān)。
　　本課題以我國最大的茶葉品類—綠茶為對象，選用五月份生長的龍井43茶樹采制的炒青綠茶及其鮮葉為原料，采用復(fù)合酶、水提、堿提等提取方法從中制備茶多糖CTPC-E(crude tea polysaccharideconjugates extracted with enzymes, CTPC-E)、TPC-E(tea poly

3、saccharideconjugates extracted with enzymes)、 TPC-W(water-extracted teapolysaccharides conjugates, TPC-W)、TPC-A(alkali-extracted teapolysaccharides conjugates,TPC-A)和TPC-L(Tea polysaccharideconjugates prepared from fresh

4、 leaves，TPC-L)，并研究其多方面的理化特性，為茶多糖產(chǎn)品的制備及質(zhì)量控制提供技術(shù)指標(biāo)和參數(shù)。同時(shí)，本課題還進(jìn)行了綠茶多糖在1型糖尿病和2型糖尿病的前驅(qū)階段-糖耐量降低(impaired glucose tolerance， IGT)中的預(yù)防作用體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究，以及對人肝癌細(xì)胞HepG2增殖的影響作用。研究結(jié)果可為茶多糖的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。
　　主要研究結(jié)果如下:
　　(1)不同提取方法制備的綠茶多糖中性單糖組成

5、可達(dá)6-7種，分別是鼠李糖、巖藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。其中鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖為主要組成單糖，在各多糖中三者摩爾含量合計(jì)達(dá)到73-93％。綠茶多糖的中性糖含量測定，應(yīng)以這三種單糖并按組成的平均比例配制成標(biāo)準(zhǔn)品;通過計(jì)算， CTPC-E、TPC-E、TPC-W、TPC-A和TPC-L中鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖平均摩爾比例為1∶1.4∶1.6。組成綠茶多糖的酸性單糖為半乳糖醛酸，綠茶多糖中酸性糖含量測定應(yīng)采用半乳糖

6、醛酸作為標(biāo)準(zhǔn)品。
　　(2) CTPC-E和TPC-E含有15種氨基酸，TPC-W和TPC-A含有16種氨基酸，TPC-L含有15種氨基酸;各綠茶多糖均未檢測出游離氨基酸存在，表明測定的氨基酸為蛋白質(zhì)（多肽）組成氨基酸。
　　(3) CTPC-E、TPC-E、TPC-W、TPC-A和TPC-L無等電點(diǎn)，不顯示出蛋白質(zhì)（多肽）的酸堿電離特性;UV-Vis掃描光譜顯示，各綠茶多糖無蛋白質(zhì)（多肽）的紫外特征吸收;SDS-PAGE電

7、泳中不顯示出蛋白質(zhì)（多肽）條帶。綜合分析表明，綠茶多糖蛋白質(zhì)部分的電荷特性、紫外可見光吸收特性以及對考馬斯亮藍(lán)G-250的結(jié)合特性被“屏蔽”，顯示出多糖的理化特性。推測，綠茶多糖的糖鏈?zhǔn)亲鳛殡逆湹膫?cè)鏈和親水基團(tuán)暴露在空間結(jié)構(gòu)外面，從而“屏蔽”了其蛋白質(zhì)（多肽）部分的諸多特性。
　　(4)各綠茶多糖在紫外-可見光區(qū)域的特征吸收為吸附于其上的色素分子所致，通過掃描茶多糖在200-400nm的吸收光譜，可以作為茶多糖色素脫除程度的檢測方

8、法。
　　(5)溫度是綠茶多糖組分分布和構(gòu)象發(fā)生質(zhì)變的決定因素。HPGPC-ELSD與CD聯(lián)用技術(shù)，可以精確測定茶多糖復(fù)合物經(jīng)熱力作用后的組分分布和溶液構(gòu)象變化及變化程度，可作為茶多糖這類含共價(jià)結(jié)合蛋白質(zhì)的多糖復(fù)合物質(zhì)量控制分析手段。
　　(6)不同提取方法制備的綠茶多糖均具有高吸濕性和持水性，保存的環(huán)境濕度宜低于50％。Zeta電位測定結(jié)果表明，它們均是帶負(fù)電荷的酸性多糖，在pH5.0-8.0的溶液體系中穩(wěn)定性最高。