鹽脅迫下水稻根尖質(zhì)膜蛋白質(zhì)組的研究.pdf

1、本論文以粳稻推廣品種徐稻三號為實驗材料，通過兩相分配法提取根尖細胞高純度質(zhì)膜，并利用IEF/SDS-PAGE雙向電泳對鹽脅迫下質(zhì)膜蛋白質(zhì)組進行了初步研究，主要內(nèi)容如下： 1.水稻根尖質(zhì)膜蛋白質(zhì)雙向電泳條件的優(yōu)化 利用葡聚糖-聚乙二醇兩相分配法純化得到純度接近90％的質(zhì)膜組分，使用4種不同的水化液溶解質(zhì)膜蛋白，進行IEF/SDS-PAGE雙向電泳和MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜分析。結(jié)果表明，4種水化液中，以7 mol/L

2、 Urea，2 mol/L Thiourea，4％CHAPS，20 mmol/L DTE，1％ASB14的條件對膜蛋白的溶解效果和雙向電泳分離效果最好；17個被鑒定蛋白中有9個為質(zhì)膜相關(guān)蛋白，5個為未知蛋白，來自其它細胞器的污染蛋白僅有3個。研究表明，在常用雙向電泳水化液中添加磺基甘氨酸三甲內(nèi)鹽ASB14有利于植物細胞質(zhì)膜蛋白質(zhì)組的分析，并且該優(yōu)化條件下的雙向電泳適合分離水稻質(zhì)膜中親水性相對較高的膜附著蛋白。 2.水稻根尖質(zhì)膜蛋

3、白質(zhì)SDS-PAGE的分離與跨膜蛋白的鑒定 利用高鹽(0.6 mol/L KCl)和溫和去污劑(15 mmol/L CHAPS)對純化的質(zhì)膜進行洗滌，以降低質(zhì)膜組分的復雜程度，通過SDS-PAGE單向電泳分離和LC-MS/MS質(zhì)譜分析，鑒定了8個質(zhì)膜蛋白。結(jié)果表明，經(jīng)洗滌后的質(zhì)膜組分復雜度顯著降低，SDS-PAGE中的每個單一蛋白條帶中只包含1～2種蛋白，且主要為疏水性較強的跨膜蛋白。 3.鹽脅迫下水稻根尖質(zhì)膜蛋白質(zhì)組的

4、比較研究 用150 mmol/L的NaCl處理水培根尖48h，提取質(zhì)膜進行雙向電泳分析，經(jīng)光密度掃描和定量分析，發(fā)現(xiàn)34個差異蛋白點，其中16個在脅迫后上調(diào)，18個在脅迫后下調(diào)，質(zhì)譜鑒定表明這些表達量變化的膜相關(guān)蛋白涉及很多重要的生理過程，如膜的穩(wěn)定性，離子動態(tài)平衡和信號轉(zhuǎn)導等。同時選取三個脅迫響應(yīng)蛋白進行實時定量PCR檢測，兩個蛋白在鹽脅迫前后轉(zhuǎn)錄水平與蛋白水平變化一致，另一個脅迫響應(yīng)蛋白在轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有發(fā)生顯著變化。證明真核生