低頻低能量超聲聯(lián)合微泡對人前列腺細胞形態(tài)、彈性模量及生物學行為的影響.pdf

1、目的：觀察低頻低能量超聲聯(lián)合微泡作用后，人前列腺癌細胞DU145、PC-3及正常前列腺上皮細胞RWPE-1的細胞形態(tài)、細胞彈性及生物學行為的改變。
　　方法：實驗分3組：對照組、單純超聲組、超聲聯(lián)合微泡組。每種細胞的對照組均加入一定比例的生理鹽水，不進行超聲輻照；單純超聲組加入等比例的生理鹽水后運用超聲輻照；超聲聯(lián)合微泡組加入等比例的微泡造影劑懸濁液，運用超聲輻照。輻照的超聲發(fā)射頻率為21KHz，間斷輻照2min，占空比30％（開

2、3s，停7s）。各組細胞在處理過后立即用原子力顯微鏡觀察其形貌并計算其楊氏模量；同時，對同一處理方式的對照組及超聲聯(lián)合微泡組細胞繼續(xù)培養(yǎng)24h，運用CCK-8試劑盒及Transwell小室測其細胞增殖及遷移能力并用透射電鏡觀察細胞形態(tài)；運用western blot方法檢測同一處理方式的對照組及超聲聯(lián)合微泡組細胞的LC3蛋白表達的變化。
　　結(jié)果：
　　1．單純超聲組的DU145細胞、PC-3細胞及RWPE-1細胞的細胞形態(tài)與

3、對照組無明顯變化；低頻超聲聯(lián)合微泡組的三種細胞胞膜表面可見孔狀結(jié)構(gòu)，PC-3細胞及DU145細胞細胞膜完整性遭到破壞，與對照組相比三種細胞的彈性模量均變大，PC-3細胞尤甚。
　　2．CCK-8檢測細胞增殖實驗結(jié)果顯示：與對照組細胞相比，PC-3細胞的超聲聯(lián)合微泡組細胞增殖能力減低（P=0.022），而DU145細胞及RWPE-1細胞超聲聯(lián)合微泡組細胞增殖能力無明顯變化。運用Transwell小室的遷移實驗結(jié)果顯示：與對照組相比，

4、低頻超聲聯(lián)合微泡組的兩種前列腺癌細胞DU145及PC-3的遷移能力減低（P=0.015，P=0.017）。透射電鏡觀察結(jié)果示：對照組的三種細胞個別細胞內(nèi)可見自噬體或自噬溶酶體，而超聲聯(lián)合微泡組三種細胞內(nèi)均見約20%細胞內(nèi)出現(xiàn)多個自噬泡及自噬溶酶體。Western Blot檢測各組細胞LC3蛋白的表達，結(jié)果顯示DU145細胞、PC-3細胞、RWPE-1細胞的超聲聯(lián)合微泡組細胞的LC3II的量都較對照組增加(對照組 LC3II/超聲聯(lián)合微泡

5、組 LC3II分別為156%，138%，244%)。
　　結(jié)論：
　　1．本研究條件下低頻低能量超聲聯(lián)合微泡可引起前列腺癌DU145細胞、PC-3細胞及正常前列腺上皮RWPE-1細胞細胞膜出現(xiàn)孔狀結(jié)構(gòu)，破壞DU145細胞及PC-3細胞細胞膜的完整性，致細胞彈性模量增高。
　　2．本研究條件下低頻低能量超聲聯(lián)合微泡抑制前列腺癌PC-3細胞的增殖及DU145細胞的PC-3細胞的遷移。
　　3．本研究條件下的低頻低能量