Basigin1-CD147在癌發(fā)生中的作用研究.pdf

1、癌發(fā)生或腫瘤發(fā)生是正常細胞轉變成癌細胞的致癌過程。癌發(fā)生是細胞水平、基因水平和表觀遺傳水平發(fā)生改變而特化的進程，最終重新編程細胞導致不受控制的細胞分裂，從而形成惡性腫瘤。
　　Basigin（Bsg）也稱為白細胞分化抗原147（cluster of differentiation147,CD147），其蛋白質通過basigin基因編碼。CD147分子是免疫球蛋白超家族（immunoglobulin superfamily,IgSF

2、）的一員。CD147分子在正常組織中的表達主要局限于生殖道、腦部、眼部和肌肉。然而，CD147分子可被重新激活并表達在不同類型的腫瘤組織中，包括腦瘤、肺癌、乳腺癌、結腸癌、膀胱癌和肝癌等，而且發(fā)現(xiàn)其與腫瘤的侵襲有關。同時，CD147分子被認為是腫瘤診斷和預后的分子標志物。CD147分子還被認為是瘧原蟲結合人血紅細胞必需的受體。
　　自從人類和小鼠基因組計劃完成以來，人們對于小鼠遺傳學性質和規(guī)模的理解發(fā)生了巨大的轉變。對由化學誘導或

3、靶向基因技術產(chǎn)生的突變基因進行高通量分析的新技術得以發(fā)展，使得人們更好地理解哺乳動物的基本生物學特性，更為重要的是創(chuàng)造新的或改進動物模型來研究人類疾病。轉基因小鼠的基因組包括除了正?；蛑獾耐庠椿?，這一外源基因則是利用重組DNA技術構建的。將純化的DNA顯微注射到受精卵單細胞期的原核中，之后移植到代孕母鼠體內。轉基因隨機整合到基因組中（通常以多拷貝頭尾串狀排列的方式），并作為一個孟德爾遺傳性狀傳遞，轉基因原代小鼠得以建立品系并穩(wěn)定遺

4、傳。
　　我們前期的研究證實了CD147分子通過TGF-β信號通路促進了上皮細胞-間質轉化，并且在轉錄水平受到Slug調節(jié)，以及CD147分子在體內水平促進了肝癌形成。然而，得出的這一結論并未通過遺傳工程小鼠模型得到證實。為此，有必要使用轉基因小鼠模型探討CD147分子在癌發(fā)生中的作用。
　　我們研究的第一個目的是在體外水平證實CD147分子的過表達是否促進了細胞的惡性表型。雖然CD147分子已被報道在多種上皮來源的腫瘤細胞

5、中異常表達，參與了腫瘤細胞的轉移和侵襲行為，但是其在腫瘤形成即癌發(fā)生中的功能卻不是很清楚。我們研究的第二個目的是構建轉基因小鼠模型來分析Basigin1/CD147的功能。
　　研究分為兩部分：
　　第一部分：CD147過表達促進細胞惡性表型的功能研究。我們利用本科室已建立的穩(wěn)定轉染CD147分子的QZG細胞和CHO細胞，并進行表達驗證。在體外水平進行軟瓊脂克隆形成實驗、Transwell小室侵襲實驗、細胞接觸抑制喪失實驗和

6、細胞凋亡檢測實驗。研究結果表明，穩(wěn)定轉染CD147分子的細胞克隆形成能力、侵襲能力、抗凋亡能力均增強，并且出現(xiàn)了接觸抑制喪失現(xiàn)象。瞬時轉染CD147分子至QZG細胞和MCF10A細胞中，檢測癌基因H-ras和抑癌基因PTEN在mRNA水平的表達情況，結果顯示，H-ras表達升高而PTEN表達降低。這些結果表明，CD147過表達可以促進細胞惡性表型。
　　第二部分：Basigin1/CD147轉基因小鼠模型的建立。我們構建攜帶綠色熒