CD109在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf

1、研究背景：
　　胰腺癌因其發(fā)病隱匿而成為惡性程度最高的腫瘤之一，絕大多數(shù)的病人就診時(shí)已經(jīng)是局部侵襲或已發(fā)生轉(zhuǎn)移，這就導(dǎo)致胰腺癌的平均存活期限是3～6個(gè)月，并且確診胰腺癌后，與其他常見惡性腫瘤相比，其治療方法有限。因此，尋找與胰腺癌相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物，為腫瘤治療提供新的靶向，成為研究者們關(guān)注的熱點(diǎn)。以往研究證實(shí)PRSS3的高表達(dá)與胰腺癌生存呈負(fù)相關(guān)，分泌到細(xì)胞外的PRSS3可裂解細(xì)胞膜蛋白CD109，但裂解產(chǎn)物在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展中的作

2、用機(jī)制尚未見報(bào)道。
　　目的：
　　本研究的目的是分析PRSS3裂解CD109蛋白的裂解位點(diǎn)及研究裂解產(chǎn)物在胰腺癌中的作用機(jī)制，尋找胰腺癌可能的治療靶點(diǎn)，為胰腺癌靶向治療奠定重要的分子理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　用Western blotting方法檢測(cè)8種人胰腺癌細(xì)胞系BxPC-3、PANC-1、Patu8988s、Miapaca-2、CFPAC-1、Capan-1、Suit-2、Patu8988t細(xì)胞中CD1

3、09蛋白表達(dá)水平；生物素標(biāo)記的胰腺癌細(xì)胞Patu8988s與活性PRSS3孵育后，收集上清中脫落的tCD109片段，用nanoLC-MS/MS法分析裂解片段；根據(jù)CD109的裂解位點(diǎn)構(gòu)建tCD109動(dòng)物細(xì)胞分泌型表達(dá)載體pSec-tCD109；將pSec-tCD109轉(zhuǎn)染到Patu8988t和Miapac-2細(xì)胞，采用MTT及Transwell方法觀察tCD109對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、遷移和浸潤(rùn)的影響；應(yīng)用免疫共沉淀分析 tCD109與TGF

4、-β受體的作用關(guān)系及其調(diào)節(jié)細(xì)胞生物學(xué)行為的信號(hào)通路。
　　結(jié)果：
　　1.在胰腺癌細(xì)胞中，BxPC-3、PANC-1、Patu8988s、Suit-2高表達(dá)CD109蛋白，而CFPAC-1、Capan-1、Miapaca-2、Patu8988t未檢測(cè)出CD109蛋白表達(dá)或只檢出低水平表達(dá)。
　　2.在胰腺癌Patu8988s細(xì)胞中，PRSS3的表達(dá)能夠裂解細(xì)胞膜表面CD109蛋白，裂解位點(diǎn)在R663-F664之間。

5、r>　　3.蛋白裂解片段V22-R663即tCD109可促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的增殖。MTT檢測(cè)Patu8988t-tCD109組細(xì)胞數(shù)（1.967±0.056）明顯高于Patu8988t-pcDNA3.1組（1.224±0.051）（p<0.05）。同樣，Miapac-2-tCD109組細(xì)胞數(shù)（2.266±0.027）也明顯高于Miapac-2-pcDNA3.1組（1.409±0.06）（p<0.05），
　　4.tCD109具有促進(jìn)胰

6、腺癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力。Transwell結(jié)果顯示Patu8988t-tCD109穿過(guò)Matrigel及膜的數(shù)量（42.54±3.21）明顯高于對(duì)照組（10.10±2.30）（p<0.05）。
　　5.tCD109與TGF-β1競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合TGF-β受體，從而抑制其下游信號(hào)傳導(dǎo)。
　　結(jié)論：
　　1.PRSS3裂解CD109的產(chǎn)物，即功能活性片段tCD109可與TGF-β1競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合TGF-β受體，從而抑制其下游信號(hào)