NEK9異常表達(dá)在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用研究.pdf

1、目的:乳腺癌是女性常見惡性腫瘤，近年來發(fā)病率逐年上升，已躍居女性惡性腫瘤的第一位。手術(shù)切除輔以術(shù)后化療和內(nèi)分泌治療是乳腺癌治療的主要方法。近年來，乳腺癌的分子機(jī)制研究和治療取得了巨大進(jìn)展，但乳腺癌仍然嚴(yán)重危害女性的生命及生活質(zhì)量，其中腫瘤局部擴(kuò)散、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后和限制生存率的主要原因。深入研究乳腺癌的分子發(fā)病機(jī)制，探索浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的機(jī)制，尋找新的抗癌策略，可以為乳腺癌患者尤其是缺乏有效治療的患者提供新的靶向治療，有

2、效提高病人預(yù)后及生存率。Nek9是Nek家族成員之一，Nek9在中心粒復(fù)制、分離和紡錘體的形成等細(xì)胞周期過程中起重要作用，Nek9的異常表達(dá)也可以引起胞質(zhì)的異常分裂及同源染色體的錯(cuò)誤分離，目前為止，關(guān)于Nek9的相關(guān)研究，尤其是其在腫瘤中作用的報(bào)道甚少。本研究擬檢測(cè)Nek9在乳腺癌及常見良性乳腺疾病中的表達(dá)情況，研究其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，并初步探討其作用機(jī)制。
　　方法:收集乳腺癌及常見良性乳腺病變標(biāo)本，并完善相關(guān)臨床病理資

3、料。采用免疫組化方法檢測(cè)浸潤(rùn)性乳腺癌及正常乳腺組織、乳腺增生、纖維腺瘤、導(dǎo)管內(nèi)癌中NEK9蛋白的表達(dá)情況，比較同一病例浸潤(rùn)性癌與導(dǎo)管上皮增生、導(dǎo)管內(nèi)癌、浸潤(rùn)癌以及淋巴結(jié)內(nèi)轉(zhuǎn)移癌之間的表達(dá)差異，并分析NEK9表達(dá)水平與臨床病理指標(biāo)的之間的關(guān)系。分別將siRNA和含Nek9的質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染進(jìn)激素受體陽性乳腺癌MCF-7細(xì)胞系，將含Nek9的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)三陰性乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-468，Western blot檢測(cè)Nek9的干擾效率和過表達(dá)

4、效率。EdU實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后腫瘤細(xì)胞增殖能力的變化;遷移與浸潤(rùn)實(shí)驗(yàn)觀察Nek9對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移浸潤(rùn)能力的影響;通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)Nek9對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果:在316例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中，NEK9的表達(dá)與組織學(xué)級(jí)別(p＜0.0001)、腫瘤大小(p=0.0087)、HER-2擴(kuò)增(p=0.0016)、p53突變(p＜0.0001)、ki67高表達(dá)(p=0.0020)顯著相關(guān);與ER、PR表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

5、(p＜0.0001);三陰性乳腺癌中NEK9表達(dá)降低或缺失明顯高于其他分子亞型(p＜0.0001)。我們發(fā)現(xiàn)激素受體陽性乳腺癌中，導(dǎo)管內(nèi)癌、浸潤(rùn)性癌、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中NEK9表達(dá)依次降低(p＜0.0001)，但導(dǎo)管內(nèi)癌與導(dǎo)乳腺增生之間NEK9表達(dá)沒有差異。體外實(shí)驗(yàn)中證實(shí)沉默Nek9可以促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移和浸潤(rùn)，抑制凋亡，同時(shí)導(dǎo)致處于G2和M期的腫瘤細(xì)胞增多，同樣的，將Nek9的質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染進(jìn)乳腺癌細(xì)胞系中，細(xì)胞的遷移浸潤(rùn)能力受到抑制，

6、細(xì)胞增殖能力下降，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，同時(shí)處于G2和M期的細(xì)胞減少，影響細(xì)胞周期過程。
　　結(jié)論:
　　1.在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中，NEK9的表達(dá)與腫瘤大小、組織學(xué)級(jí)別、HER-2擴(kuò)增、p53功能失常、高增殖指數(shù)呈負(fù)相關(guān)，與ER、PR的表達(dá)水平呈正相關(guān)。
　　2.NEK9表達(dá)降低或缺失多見于三陰性乳腺癌，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)亦顯示封閉Nek9促進(jìn)三陰性乳腺癌腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，Nek9或參與了三陰性乳腺癌的發(fā)病。
　　3.同一病例中，從導(dǎo)

7、管內(nèi)癌到浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌到腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，NEK9的表達(dá)逐步下降，體外實(shí)驗(yàn)也證實(shí)干擾Nek9可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞遷移和浸潤(rùn)，提示Nek9在乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。
　　4.NEK9表達(dá)異?？赡芡ㄟ^抑制細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期G2/M檢測(cè)點(diǎn)失控，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖，參與三陰性乳腺癌的發(fā)生，并在乳腺癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮作用。
　　5.NEK9有望成為新的生物標(biāo)記物，幫助發(fā)現(xiàn)新的乳腺癌分子亞型，為乳腺癌的診斷、治療、預(yù)后提供新的研究依