乳腺癌中Vmp1表達(dá)及預(yù)后意義和Nek2剪接體在乳腺癌發(fā)生不同階段表達(dá)差異的研究.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分、空泡膜蛋白1在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系
　　 目的：
　　 1.探討空泡膜蛋白1在人乳腺浸潤性導(dǎo)管癌和含導(dǎo)管原位癌成分的浸潤性導(dǎo)管癌組織中的蛋白表達(dá)情況。
　　 2.初步闡述在人乳腺組織中空泡膜蛋白1的表達(dá)規(guī)律及空泡膜蛋白1的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系。
　　 方法：
　　 隨機(jī)抽取乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織102例，其中32例為含導(dǎo)管原位癌成分。采用免疫

2、組織化學(xué)方法檢測空泡膜蛋白1在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的表達(dá)、定位，并與其它多個臨床病理參數(shù)進(jìn)行比較分析。全部數(shù)據(jù)由SPSS19.0統(tǒng)計軟件完成統(tǒng)計學(xué)分析，x2檢驗(yàn)用于定性資料間的比較，Spearman's相關(guān)性檢驗(yàn)用于變量間的相關(guān)性分析，Kaplan-Meier生存曲線進(jìn)行生存分析，用log-rank檢驗(yàn)分析生存曲線的差異。應(yīng)用COX比例風(fēng)險回歸模型(Cox's proportional hazardsregression model，

3、簡稱Cox模型)行多因素分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示空泡膜蛋白1在乳腺組織中陽性著色部位為細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞質(zhì)中可見棕黃色顆粒著色，陽性率為57.8％，在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中空泡膜蛋白1的表達(dá)與不同的腫瘤組織學(xué)分級（x2=12.644，P=0.002），pTNM分期(x2=11.987，P=0.001)，淋巴結(jié)狀態(tài)（x2=9.341，P=0.002），腫物最大徑（x2

4、=7.630，P=0.022），NPI(x2=15.561，P=0.000)密切相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 2、在32例含有導(dǎo)管原位癌成分的浸潤性導(dǎo)管癌病例中，空泡膜蛋白1表達(dá)率在導(dǎo)管原位癌中比其旁的浸潤性導(dǎo)管癌中要高，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=4.433,P=0.035）。
　　 3、患者術(shù)后平均無病生存期81.2個月，五年總生存率為90.1％，無病生存率為81.3％。空泡膜蛋白1的表達(dá)對無病生存曲線分布有明顯影響

5、，我們的結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中空泡膜蛋白1陰性表達(dá)的患者比陽性表達(dá)的患者預(yù)后差(x2=11.192，P=0.001)，多因素分析顯示空泡膜蛋白1是一個保護(hù)因素，相對危險度＜1。
　　 結(jié)論：
　　 空泡膜蛋白1蛋白在乳腺組織中表達(dá)，陽性表達(dá)部位均為細(xì)胞質(zhì)，空泡膜蛋白1蛋白的表達(dá)率在導(dǎo)管原位癌中比浸潤性導(dǎo)管癌組織中要高，此外我們的研究結(jié)果還顯示浸潤性導(dǎo)管癌組織中空泡膜蛋白1蛋白的表達(dá)具有較良好的估測預(yù)后價值，當(dāng)空泡膜蛋白1陽性提示預(yù)

6、后較好。
　　 第二部分、Nek2三種剪接異構(gòu)體在乳腺癌發(fā)生不同階段組織中表達(dá)差異的研究
　　 目的：
　　 探索中心體相關(guān)蛋白激酶2 (NIMA-related kinase2,Nek2)的三個剪接異構(gòu)體Nek2A, Nek2B,Nek2C在乳腺上皮惡性轉(zhuǎn)化中的作用，并結(jié)合本課題組前期研究成果，進(jìn)一步探討乳腺癌早期診斷標(biāo)志物及預(yù)后檢測指標(biāo)，并為研究癌前病變、早期癌變的基因治療提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　

7、 方法：
　　 抽取簡單模擬人乳腺癌多階段發(fā)生、發(fā)展模式的四組乳腺組織石蠟標(biāo)本:正常組織及一般性增生20例、不典型增生20例、導(dǎo)管原位癌20例和浸潤性導(dǎo)管癌(非特殊型)20例，采用原位雜交的方法同時檢測四組樣本中三個剪接異構(gòu)體的mRNA表達(dá)水平，并進(jìn)行組間兩兩比較。加大上述四組標(biāo)本量各至60例同時采用免疫組織化學(xué)方法檢測Nek2B的蛋白表達(dá)、定位，并與其他多個臨床病理參數(shù)進(jìn)行比較分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、

8、光鏡下觀察結(jié)果，可見導(dǎo)管上皮陽性細(xì)胞胞漿內(nèi)呈均勻著色的淡黃色-棕/黃色顆粒，陽性細(xì)胞密集或(和)散在分布，乳腺正常組織和不典型增生組陽性率和強(qiáng)度小于導(dǎo)管原位癌和浸潤性導(dǎo)管組，隨著組織類型的惡性程度的增加，Nek2A, Nek2B, Nek2C mRNA表達(dá)的陽性率也呈逐漸上升趨勢，正常導(dǎo)管上皮陽性率最低分別為(15.0%, 20.0%, 25%)，發(fā)展到浸潤性導(dǎo)管癌時達(dá)最高分別為(65.0%, 65%, 80%)。兩兩組間比較Nek2A

9、, Nek2B,Nek2C mRNA表達(dá)水平:浸潤性導(dǎo)管癌組明顯高于正常乳腺組(P=0.002, P=0.004, P=0.000)和不典型增生組(P=0.006, P=0.009, P=0.004)，導(dǎo)管原位癌組高于正常乳腺組(P=0.003，P=0.020, P=0.001)和不典型增生組(P=0.009, P=0.040, P=0.035)。不典型增生組高于正常乳腺組(P=0.637, P=0.786, P=0.461)、導(dǎo)管原位

10、癌組和浸潤性導(dǎo)管癌組均沒有顯著性差異((P=0.698, P=0.602, P=0.445)。
　　 2、組織陽性表達(dá)部位為細(xì)胞質(zhì)，與正常乳腺組織相比，Nek2B蛋白的表達(dá)水平在導(dǎo)管原位癌和浸潤性導(dǎo)管癌中增高(P =0.002, P =0.000)，在浸潤性導(dǎo)管癌組中，Nek2B的蛋白表達(dá)在不同的腫瘤大小(P<0.001)，組織學(xué)級別(P =0.011),分子亞型(P=0.021)和ki-67 (P=0.017)間差異有統(tǒng)計學(xué)意

11、義。相關(guān)分析顯示:在浸潤性導(dǎo)管癌組織中，Nek2B蛋白的表達(dá)與組織學(xué)分級呈正相關(guān)(r=0.426, P=0.001)。
　　 結(jié)論：
　　 1、在簡單模擬乳腺癌多階段發(fā)生、發(fā)展模式(正常乳腺上皮細(xì)胞→導(dǎo)管上皮不典型增生→導(dǎo)管原位癌→浸潤性癌)中Nek2A, Nek2B, Nek2C mRNA的表達(dá)水平表現(xiàn)為逐步增加的趨勢。
　　 2、在浸潤性導(dǎo)管癌中Nek2B蛋白的表達(dá)與組織學(xué)分級呈正相關(guān)。Nek2B蛋白表達(dá)在導(dǎo)