乳腺癌的分子分型及Nek2B在乳腺中表達(dá)及作用的研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文乳腺癌的分子分型及Nek2B在乳腺中表達(dá)及作用的研究姓名：王亞紅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)；腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：牛昀201205天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文第二部分目的檢測(cè)乳腺癌發(fā)生發(fā)展模型MCFl0細(xì)胞系中Nek2B的表達(dá)情況；觀察重組Nek2B質(zhì)粒在癌變前細(xì)胞系中的作用以及Nek2BsiRNA對(duì)癌細(xì)胞系的影響；觀察Nek2BsiRNA在裸鼠成瘤模型中的應(yīng)用以及Nek2BmRNA在接受含紫杉醇的新輔助化療患者中的

2、表達(dá)。方法以國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究為依據(jù)，用MCFl0A、MCFlOAT、MCFl0DCIScom和MCFl0CAl四個(gè)細(xì)胞系建立乳腺癌發(fā)生發(fā)展模型。westernblot技術(shù)檢測(cè)四種細(xì)胞中Nek2蛋白的表達(dá)水平，應(yīng)用細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法將重組Nek2B質(zhì)粒與siIⅢA轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)，采用PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中Nek2B的表達(dá)情況，流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光雙染色技術(shù)、克隆形成實(shí)驗(yàn)、MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的不同變化。利用MCFl0CAl細(xì)胞建立裸鼠成瘤模型，觀

3、察Nek2BsiRNA以及化療藥物紫杉醇對(duì)裸鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的影響。觀察接受含紫杉醇的新輔助化療患者術(shù)后瘤體內(nèi)Nek2BmRNA的表達(dá)情況與患者對(duì)化療反應(yīng)的關(guān)系以及與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。結(jié)果1Nek2及Nek2B在癌前細(xì)胞系MCFl0A、MCFlOAT中低表達(dá)，在癌細(xì)胞系MCFl0DCIScorn、MCFl0CAI中高表達(dá)。2在癌前細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染重組Nek2B質(zhì)粒DNA結(jié)果顯示，與對(duì)照組細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中心體表達(dá)情況與細(xì)胞周期變化

4、不明顯(尸005)。在癌細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染Nek2BsiRNA結(jié)果顯示，與對(duì)照組細(xì)胞相比，MCFl0DCIScom轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中出現(xiàn)大量多核細(xì)胞(尸O05)，MCFl0CAl細(xì)胞轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖能力減弱，且經(jīng)不同濃度紫杉醇處理24h后，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞死亡數(shù)高于對(duì)照組(P005)。3Nek2BsiRNA處理組的裸鼠腫瘤生長(zhǎng)均較PBS組與對(duì)照siRNA組減慢(尸005)，紫杉醇聯(lián)合Nek2BsiRNA處理組裸鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)較單獨(dú)應(yīng)用Nek2BsiRNA組