雌激素對(duì)乳腺癌CD147表達(dá)的調(diào)節(jié)及在乳腺正常發(fā)育和乳腺癌進(jìn)展轉(zhuǎn)移中的意義.pdf

1、研究背景：
　　眾所周知，乳腺癌是全球女性高發(fā)的主要惡性腫瘤之一。乳腺癌是內(nèi)分泌相關(guān)性腫瘤。雌激素在乳腺癌的發(fā)病、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中起重要作用。乳腺癌主要的致死因素是轉(zhuǎn)移。因此，乳腺癌轉(zhuǎn)移的防治，是降低乳腺癌病死率的關(guān)鍵。然而，有關(guān)乳腺癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，目前仍未有透徹的了解。CD147是一屬于免疫球蛋白超家族的跨膜糖蛋白，可誘導(dǎo)周圍細(xì)胞表達(dá)并分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrixmetalloproteinase，MMP）。MMP引發(fā)的基質(zhì)降

2、解在腫瘤的轉(zhuǎn)移過程中起著必不可少的作用。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，很多腫瘤呈現(xiàn)CD147過表達(dá)。然而，有關(guān)CD147自身表達(dá)的調(diào)控卻所知甚少。
　　雌激素的信號(hào)經(jīng)其受體ER介導(dǎo)。ER有兩種，即ERα和ERβ。目前對(duì)ERα的研究更為深入透徹。本研究所述ER指ERα。ER在未與配體結(jié)合時(shí)，與熱休克蛋白HSP結(jié)合存在于細(xì)胞質(zhì)中。在與雌激素結(jié)合后，其空間構(gòu)象發(fā)生改變，被轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核，以二聚體形式結(jié)合于ERE位點(diǎn)，啟動(dòng)靶基因轉(zhuǎn)錄。ERE是ER的經(jīng)典作用位點(diǎn)

3、。除ERE外，ER還可與SP1或AP1蛋白結(jié)合，分別作用于SP1和AP1位點(diǎn)，加強(qiáng)這兩個(gè)蛋白的轉(zhuǎn)錄活性。SP1和AP1被稱為ER的非經(jīng)典作用位點(diǎn)，是通過SP1和AP1間接發(fā)揮作用。鑒于CD147的啟動(dòng)子上游序列中含有SP1蛋白結(jié)合位點(diǎn)，CD147應(yīng)該是ER作用的靶基因之一，我們假設(shè)，雌激素通過激活CD147的表達(dá)，在乳腺的正常發(fā)育和乳腺癌的浸潤(rùn)生長(zhǎng)以及轉(zhuǎn)移過程中，發(fā)揮了重要的作用。
　　本研究將對(duì)CD147，以及雌激素和其受體信號(hào)

4、系統(tǒng)在乳腺癌的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮的生物學(xué)作用有更深一步的了解，為探討CD147作為乳腺癌靶向治療的靶點(diǎn)提供進(jìn)一步的理論基礎(chǔ)。
　　目的：
　　探究雌激素對(duì)乳腺癌CD147表達(dá)的調(diào)節(jié)及在乳腺正常發(fā)育和乳腺癌進(jìn)展轉(zhuǎn)移中的意義。檢測(cè)成年小鼠卵巢切除后子宮CD147表達(dá)的變化，原則證明CD147表達(dá)受ER調(diào)控，雌激素是上游信號(hào)；觀察人乳腺正常組織及ER陽(yáng)性乳腺癌與ER陰性乳腺癌CD147的表達(dá)。用雌激素處理人乳腺癌細(xì)胞系，檢測(cè)用藥

5、前后細(xì)胞中CD147mRNA及蛋白表達(dá)水平變化，并觀察雌激素處理后對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移能力的影響。
　　方法：
　　1）將6只8周齡的雌性昆明小白鼠隨機(jī)分為兩組，各組3只，一組進(jìn)行卵巢去勢(shì)手術(shù)，另一組進(jìn)行假手術(shù)作為陰性對(duì)照，48h后分別取小鼠子宮，Western-blot檢測(cè)兩組小鼠子宮中CD147蛋白表達(dá)水平變化。
　　2）在西京醫(yī)院病理科分別取人乳腺正常組織1例和22例ER陽(yáng)性及18例ER陰性人乳腺癌組織，免疫組織化學(xué)染

6、色檢測(cè)CD147的表達(dá)水平。
　　3）用雌激素處理人乳腺癌細(xì)胞系，RT-PCR及Real-timePCR定量檢測(cè)用藥前后細(xì)胞中CD147mRNA表達(dá)水平變化，Western-blot檢測(cè)用藥前后細(xì)胞中CD147蛋白表達(dá)水平變化。
　　4）用雌激素處理ER陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞株MCF-7，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的變化，對(duì)每組細(xì)胞做細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)，對(duì)比有無雌激素處理，ER陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞株MCF-7遷移能力的變化。
　　結(jié)果：

7、>　　1)Westernblot檢測(cè)顯示卵巢去勢(shì)組小鼠48h后子宮CD147表達(dá)較對(duì)照組明顯降低。
　　2)人正常乳腺上皮細(xì)胞膜表達(dá)CD147；CD147在乳腺癌組織中表達(dá)且主要在癌細(xì)胞膜，癌組織邊緣表達(dá)強(qiáng)度較高。ER陽(yáng)性癌組織明顯高于ER陰性癌組織。
　　3)經(jīng)雌激素處理后的ER陽(yáng)性人乳腺癌細(xì)胞系中CD147mRNA及蛋白的表達(dá)均呈上升趨勢(shì)，而ER陰性人乳腺癌細(xì)胞系則無明顯變化。
　　4)應(yīng)用雌激素處理MCF-7細(xì)胞

8、，觀察到雌激素能增快ER陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞株MCF-7的生長(zhǎng)和遷移，而去除雌激素作用的ER陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞株MCF-7，觀察其形態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)由梭型變圓。
　　結(jié)論：
　　1)卵巢切除后子宮CD147表達(dá)降低。原則證明CD147表達(dá)受ER調(diào)控，雌激素是上游信號(hào)。
　　2)CD147在乳腺癌細(xì)胞膜表達(dá)，癌組織與間質(zhì)的交界部表達(dá)水平高。ER陽(yáng)性乳腺癌表達(dá)強(qiáng)度高于ER陰性乳腺癌。
　　3)通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，證實(shí)雌激素通過E