長(zhǎng)鏈非編碼RNA CRNDE在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景:近年來(lái)，大量研究發(fā)現(xiàn)不同長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNAs，lncRNAs）在多種惡性腫瘤中存在特異性異常表達(dá)的現(xiàn)象，并且在腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移等過(guò)程中可能起到重要的作用。我們前期研究利用lncRNA基因芯片篩選出在胰腺癌組織及癌旁正常胰腺組織中差異表達(dá)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA分子CRNDE（colorectal neoplasia differentially expressed），但其在胰腺癌發(fā)生

2、發(fā)展中的作用及機(jī)制仍尚不明確。
　　目的:本研究旨在研究CRNDE對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖、凋亡與侵襲力的影響;探討CRNDE介導(dǎo)Hippo-YAP通路在胰腺癌細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中的分子作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.采用RT-PCR檢測(cè)CRNDE在20對(duì)胰腺癌組織及癌旁正常胰腺組織中及3種胰腺癌細(xì)胞株(AsPC-1、PANC-1和BxPC-3)中的表達(dá)情況;運(yùn)用流式細(xì)胞及Transwell實(shí)驗(yàn)探討下調(diào)CRNDE表達(dá)對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖

3、、凋亡及侵襲力的影響。
　　2.利用免疫組化檢測(cè)胰腺癌組織中Hippo-YAP通路中的關(guān)鍵因子LAST1(large tumor suppressor gene1)和YAP1(yes-associated protein)蛋白表達(dá)水平，并分析與CRNDE表達(dá)的關(guān)系;利用Western blot研究下調(diào)CRNDE表達(dá)對(duì)胰腺癌細(xì)胞LAST1和YAP1表達(dá)的影響，以驗(yàn)證CRNDE通過(guò)介導(dǎo)Hippo-YAP通路促進(jìn)胰腺癌的發(fā)生發(fā)展的重要作

4、用機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.本研究通過(guò)RT-PCR檢測(cè)20對(duì)手術(shù)切除的胰腺癌組織和癌旁正常胰腺組織中CRNDE的表達(dá)水平，結(jié)果證實(shí)CRNDE在胰腺癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁正常胰腺組織(P＜0.05)。同時(shí)，研究還發(fā)現(xiàn)在胰腺癌細(xì)胞株AsPC-1、PANC-1和BxPC-3中，CRNDE的表達(dá)水平也有不同程度的升高。我們以表達(dá)水平最高的AsPC-1細(xì)胞為研究對(duì)象，通過(guò)特異性siRNA干擾技術(shù)下調(diào)AsPC-1細(xì)胞中CRND

5、E的表達(dá)水平，經(jīng)流式細(xì)胞檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，下調(diào)CRNDE表達(dá)后AsPC-1細(xì)胞的G1期細(xì)胞比例明顯下降，G2/M期細(xì)胞比例明顯增加(P＜0.05)，而其細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組明顯提高（P＜0.05）。同時(shí)Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示下調(diào)CRNDE表達(dá)后胰腺癌細(xì)胞侵襲能力受到明顯抑制(P＜0.05)。
　　2.采用免疫組化檢測(cè)Hippo-YAP通路中LAST1和YAP1的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)LATS1蛋白在胰腺癌組織中表達(dá)水平較相應(yīng)癌旁正常胰腺

6、組織顯著下降，同時(shí)伴隨YAP1蛋白表達(dá)水平的升高。此外，直線回歸分析顯示CRNDE與LAST1和YAP1呈明顯線性關(guān)系，其中CRNDE與LAST1呈負(fù)相關(guān)，CRNDE與YAP1呈正相關(guān)。Western blot檢測(cè)提示下調(diào)胰腺癌AsPC-1細(xì)胞CRNDE表達(dá)后，LATS1蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)，而YAP1蛋白表達(dá)水平則下降。
　　結(jié)論:
　　1.研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)在胰腺癌中存在CRNDE高表達(dá)的現(xiàn)象，CRNDE異常表達(dá)促進(jìn)癌細(xì)胞的惡