長(zhǎng)鏈非編碼RNA SOX21AS1在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及主要機(jī)制的探討.pdf

1、目的：
　　胃癌是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，目前仍缺乏有效的治療措施，為了尋找新的胃癌生物標(biāo)記物及有效的治療靶點(diǎn)，在分子層面探索胃癌的發(fā)病機(jī)制非常重要。近年來(lái)，長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）在胃癌中的作用受到廣泛關(guān)注。本研究主要研究lncRNA基因表達(dá)譜在胃黏膜炎癥惡性轉(zhuǎn)變至胃癌過(guò)程中的變化，以及篩選出的lncRNA SOX21AS1對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響和主要的作用機(jī)制。
　

2、　方法：
　　我們首先在安徽省立醫(yī)院內(nèi)鏡中心收集5例正常胃黏膜組織、5例萎縮胃炎伴腸上皮化生組織、5例進(jìn)展期胃癌組織及5例癌旁組織，提取各組織總RNA進(jìn)行l(wèi)ncRNA+mRNA人類基因芯片檢測(cè)，篩選出具有差異性表達(dá)的lncRNA，熒光定量PCR檢測(cè)篩選出的lncRNA SOX21AS1在各組織中的表達(dá)情況。然后合成過(guò)表達(dá) SOX21AS1的慢病毒載體轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞 AGS和 BGC823，構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SOX21AS1的細(xì)胞株。運(yùn)用

3、流式細(xì)胞技術(shù)研究分析過(guò)表達(dá)SOX21AS1的胃癌細(xì)胞株細(xì)胞周期及凋亡的變化；劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)判斷過(guò)表達(dá)SOX21AS1對(duì)胃癌細(xì)胞遷移能力的影響；以及通過(guò)體內(nèi)異種移植 BALB/c裸鼠模型判斷過(guò)表達(dá)SOX21AS1對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。最后通過(guò)熒光定量PCR和Western bolt實(shí)驗(yàn)探索SOX21AS1可能的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　通過(guò)高通量基因芯片分析技術(shù)，以倍數(shù)變化FC>2且校正后P<0.05為標(biāo)準(zhǔn)，我

4、們篩選出176個(gè)lncRNA和215個(gè)mRNA在萎縮性胃炎組織異常表達(dá)，1428個(gè)lncRNA和3035個(gè)mRNA在胃癌組織中異常表達(dá)。在胃黏膜炎癥惡性轉(zhuǎn)變過(guò)程中均有變化的lncRNA有11個(gè)，包括p33715，p29027（H19），p7811，p6625（MIR22GH），p1457，p8725（CTD-3064h18.6），p38190-v4，p4300，p43909-v4，p36288-v4，p38901-v4。本研究選擇 p4

5、300即 SOX21AS1作為研究對(duì)象，通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)各組織中SOX21AS1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)從正常胃黏膜、萎縮性胃炎到胃癌組織中其表達(dá)逐漸下調(diào)。同時(shí)通過(guò)成功構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SOX21AS1細(xì)胞株，體外實(shí)驗(yàn)證明了SOX21AS1過(guò)表達(dá)可以使AGS胃癌細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期，抑制DNA合成，使細(xì)胞分裂增殖減弱，促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡，抑制胃癌細(xì)胞遷移。體內(nèi)異種移植裸鼠實(shí)驗(yàn)顯示，過(guò)表達(dá) SOX21AS1可以使裸鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)緩慢（P<0.0

6、01），抑制胃癌細(xì)胞成瘤性，過(guò)表達(dá)SOX21AS1瘤體的質(zhì)量（0.16±0.05g）明顯低于空白對(duì)照（0.91±0.35g）與陰性對(duì)照組（0.90±0.30g）。此外，熒光定量PCR結(jié)果顯示，SOX21基因的表達(dá)與lncRNA SOX21AS1表達(dá)明顯正相關(guān)（P<0.01），Western bolt結(jié)果顯示正常胃黏膜組織經(jīng)萎縮性胃炎發(fā)展到胃癌過(guò)程中SOX21蛋白表達(dá)量逐漸下調(diào)，CDX2在此過(guò)程中逐漸上調(diào)。同時(shí)，在細(xì)胞水平檢測(cè)結(jié)果證明，過(guò)

7、表達(dá)SOX21AS1的胃癌細(xì)胞株中SOX21蛋白表達(dá)升高，而CDX2蛋白表達(dá)量下降。
　　結(jié)論：
　　lncRNA SOX21AS1作為一個(gè)新的潛在的抑癌基因在胃黏膜炎癥惡性轉(zhuǎn)變過(guò)程發(fā)揮重要的作用，它可以通過(guò)調(diào)節(jié)SOX21-CDX2通路促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡、抑制胃癌細(xì)胞增殖和遷移，同時(shí)可以抑制異種移植裸鼠模型體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)。在理論上進(jìn)一步完善lncRNA腫瘤調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，在臨床應(yīng)用方面，為尋找到新的胃癌生物標(biāo)記物及治療靶點(diǎn)提供參考。