早發(fā)冠心病患者高密度脂蛋白抗HUVECs凋亡作用的機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過細(xì)胞實驗探究早發(fā)冠心?。≒CAD）患者高密度脂蛋白（HDLPCAD）與健康人群HDL（HDLhealth）抗人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）凋亡作用是否有區(qū)別及其可能機(jī)制。
　　方法：⑴PCAD患者和與之相匹配的健康人血樣的采集；⑵使用Lipoprint脂蛋白分析儀分析HDLhealth和HDLPCAD亞組分（HDL1-HDL10）分布情況；⑶PCAD患者和與之相匹配的健康人血樣HDL的分離、提取、鑒定；⑷分別用0μg/

2、ml、50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml的氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）處理HUVECs24小時，MTT檢測細(xì)胞存活度，明確ox-LDL引起HUVECs凋亡的合適濃度；⑸分別用0μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml的HDLhealth預(yù)處理HUVECs18小時，接著再用最適濃度的ox-LDL處理HUVECs24小時，MTT檢測細(xì)胞存活度，明確HDLhealt

3、h預(yù)處理HUVECs的最適濃度；⑹用最適濃度HDLhealth分別預(yù)處理HUVECs0小時、6小時、12小時、18小時、24小時，接著再用最適濃度的ox-LDL處理HUVECs24小時，MTT檢測細(xì)胞存活度，明確HDLhealth預(yù)處理HUVECs的最適時間；⑺用最適濃度HDLhealth、HDLPCAD對HUVECs進(jìn)行最適作用時間的預(yù)處理，再用合適濃度的ox-LDL處理HUVECs24小時，MTT檢測細(xì)胞存活度；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋

4、亡；Western blot檢測caspase-3、caspase-9蛋白的表達(dá)；用試劑盒測定活性氧（ROS）活性。
　　結(jié)果：①HDLPCAD亞組分大顆粒含量(HDL1-HDL3）為（28.5±5.74），較 HDLhealth（46.8±15.2）低，而小顆粒（HDL8-HDL10）含量為（21.4±7.75），較HDLhealth（10.9±5.38）高；②100μg/ml ox-LDL處理HUVECs24小時后細(xì)胞存活率為

5、60.34％，存活率較空白處理組出現(xiàn)顯著降低（P＜0.05）；③200μg/ml HDLhealth預(yù)處理HUVECs18h后，細(xì)胞存活率為82.01%，可以明顯減弱ox-LDL對細(xì)胞的損傷；④200μg/ml HDLhealth顯著抑制100μg/ml ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs凋亡及caspase-3、caspase-9蛋白表達(dá)和ROS的產(chǎn)生；⑤200μg/ml HDLPCAD預(yù)處理HUVECs18小時后，細(xì)胞存活率為65.5%

6、，其作用較HDLhealth（80.28%）減弱；⑥200μg/ml HDLPCAD可抑制100μM ox-LDL誘導(dǎo)HUVECs凋亡、caspase-3、caspase-9蛋白表達(dá)及ROS產(chǎn)生，但作用較HDLhealth減弱。
　　結(jié)論：HDLPCAD與HDLhealth比較，可能由于其亞組分大顆粒含量(HDL1-HDL3）較HDLhealth低，小顆粒較HDLhealth（HDL8-HDL10）高，導(dǎo)致其抗氧化功能減弱，抑制o