CD20+B細胞在胃癌中的分布、表型及免疫功能的初步研究.pdf

1、胃癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，在我國惡性腫瘤中其發(fā)病率和死亡率均位居前三。胃癌免疫一直伴隨著胃癌的發(fā)生發(fā)展及臨床轉(zhuǎn)歸，而胃癌組織中免疫細胞的浸潤及其功能調(diào)控則是影響胃癌進展的關(guān)鍵因素。
　　目前研究證實，在胃癌微環(huán)境中，包括調(diào)節(jié)性T細胞、髓樣來源的抑制性細胞(myeloid derived suppressor cells，MDSC)和腫瘤相關(guān)巨噬細胞等在內(nèi)的多個免疫細胞群參與促進胃癌的進展，而CD8+T細胞和NK細胞等作為抗腫

2、瘤效應(yīng)性細胞在抵抗胃癌進展中發(fā)揮了重要作用。近年關(guān)于乳腺癌、卵巢癌、頭頸部癌、非小細胞肺癌、結(jié)腸癌、黑色素瘤等惡性腫瘤的研究發(fā)現(xiàn)，一群表達CD20的B細胞即CD20+B細胞在腫瘤組織中大量浸潤，且腫瘤浸潤的CD20+B細胞與患者的預(yù)后密切相關(guān)。然而，在胃癌微環(huán)境中是否存在著CD20+B細胞的浸潤及其發(fā)揮怎樣的免疫功能并不清楚。因此，本文擬對CD20+B細胞在胃癌中的分布、表型特征及免疫調(diào)控功能進行初步研究，以期為發(fā)展胃癌的免疫治療方案提

3、供新的實驗證據(jù)。
　　目的：
　　1.明確CD20+B細胞在胃癌中的分布和表型特征。
　　2.初步研究CD20+細胞在胃癌中的免疫調(diào)控功能。
　　方法：
　　1.CD20+B細胞在胃癌中的分布和表型特征表達研究
　　收集重慶第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院普外科30例胃癌患者手術(shù)切除的組織標(biāo)本（同一患者的癌組織、癌旁組織和正常組織）和外周血。利用流式細胞術(shù)檢測CD20+B細胞的比例和數(shù)目。流式細胞術(shù)分析CD20+

4、B細胞表面受體和功能相關(guān)分子(CD80、CD86、CD40、IgM、IgG、HLA-ABC、HLA-DR、IgD、CD39、CD73、CD69、TRAIL)和趨化因子受體表達情況。同時用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測CD20+B細胞在癌組織和正常組織中的分布情況。
　　2.CD20+B細胞在胃癌中免疫功能的初步研究
　　流式分選胃癌組織和正常組織中的CD20+B細胞以及分選相同患者的外周血T細胞，按1∶1比例進行體外共培養(yǎng)，5天后

5、流式細胞術(shù)檢測其中的T細胞增殖和IFN-γ的表達情況。此外，利用免疫組織化學(xué)雙重染色對癌組織中CD20+B細胞與IL-10進行共定位檢測。
　　3.統(tǒng)計學(xué)方法
　　采用GraphPad Prism5.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，多個組之間的比較采用單因素方差分析，兩組之間的比較采用T檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　1.CD20+B細胞在胃癌中的分布結(jié)果
　　1.1流式細胞術(shù)檢測胃癌患者不同標(biāo)本

6、中CD20+B細胞的比例:在30例被檢標(biāo)本中，其外周血、正常組織、癌旁組織、癌組織CD20+B細胞占CD45+細胞比例均值分別為2.27％±0.35％、8.86％±1.55％、9.23％±1.46％、17.92％±2.24％。統(tǒng)計分析表明:胃癌組織中的CD20+B細胞比例與外周血、正常組織及癌旁組織相比較均具有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.001，P=0.002，P=0.002)，癌旁組織和正常組織中CD20+B細胞的比例與外周血相比較均具

7、有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.001)，而癌旁組織中CD20+B細胞的比例與正常組織相比較并無顯著性統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.863)。
　　1.2免疫組化染色結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析顯示:癌組織中的CD20+B細胞數(shù)目與正常組織相比較具有極顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)。
　　1.3胃癌患者CD20+B細胞的表型檢測結(jié)果
　　1.3.1 CD20+B細胞表面免疫球蛋白分子的表達結(jié)果
　　胃癌患者外周血和不同組織中CD20+B細

8、胞均表達IgM和IgD而不表達IgG，但組織中CD20+B細胞表達的IgM和IgD顯著低于外周血，提示組織中的CD20+B細胞為成熟的B細胞。
　　1.3.2 CD20+B細胞表達CD5及共刺激分子的表達結(jié)果
　　胃癌組織、正常組織中CD20+B細胞不表達CD5分子。
　　胃癌組織、正常組織和外周血中CD20+B細胞表達HLA-ABC、HLA-DR和CD40但低表達CD80、CD86。與正常組織和外周血相比，胃癌組織中

9、的CD20+B細胞低表達HLA-ABC和CD40，提示胃癌微環(huán)境中的CD20+B細胞激活CD8+T細胞的能力較弱。
　　1.3.3CD20+B細胞功能相關(guān)分子的表達結(jié)果
　　胃癌組織、正常組織和外周血中CD20+B細胞均不表達TRAIL和PD-L1;與外周血相比，胃癌組織和正常組織中的CD20+B細胞高表達CD69和PD-L1但低表達CD62L，CD39和CD73;而與正常組織相比，胃癌組織中CD20+B細胞更低表達CD73

10、。
　　1.3.4 CD20+B細胞增殖能力Ki-67表達結(jié)果
　　癌組織中表達Ki-67的CD20+B細胞比例顯著高于外周血，但癌組織和正常組織中表達Ki-67的CD20+B細胞比例則無明顯差異。趨化因子受體表達情況:外周血和癌組織中CD20+B細胞均不表達CXCR1、CXCR2和CXCR3，但均高表達趨化因子受體CXCR4，盡管外周血中CD20+B細胞高表達CXCR5，但癌組織中CD20+B細胞不表達CXCR5。

11、　　2.CD20+B細胞在胃癌中免疫功能的初步研究結(jié)果
　　2.1 CD20+B細胞與CD3+T細胞共培養(yǎng)實驗結(jié)果顯示:與正常組織對照組相比較，胃癌組織試驗組中CD3+T細胞增殖比例下降，而且增殖的CD3+T細胞表達IFN-γ的比例也下降，提示胃癌組織中的CD20+B細胞能夠抑制CD3+T細胞的增殖及其IFN-γ的表達。
　　2.2免疫組化雙重染色結(jié)果顯示:胃癌組織中CD20分子與IL-10在B細胞存在共表達。
　　結(jié)

12、論：
　　1.胃癌組織中CD20+B細胞占CD45+細胞的比例顯著高于癌旁組織、正常組織和外周血。免疫組化染色亦表明胃癌組織中的CD20+B細胞數(shù)量顯著高于正常組織。CD20+B細胞在胃癌組織中顯示出一定的免疫抑制表型傾向，并高表達趨化因子受體CXCR4。
　　2.胃癌組織來源的CD20+B細胞能夠抑制T細胞的增殖和IFN-γ的表達，且胃癌組織中的CD20+B細胞可表達IL-10，提示胃癌浸潤的CD20+B細胞具有免疫抑制功