異常高表達的Pim-3抑制胃癌細胞凋亡促進胃癌發(fā)生發(fā)展的實驗研究.pdf

1、胃癌(Gastric carcinoma, GC)是起源于胃上皮的消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,嚴重危害了我國人民的健康。Pim-3是具有絲氨酸/蘇氨酸激酶活性的原癌基因,Pim-3在內(nèi)胚層由來的肝癌、胰腺癌、胃癌組織中過度表達,而在這些正常組織中不表達或者低表達。并且pim-3表達與性別、胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、靜脈侵犯有密切關(guān)系。已有研究顯示Pim-3在胰腺癌細胞株中,通過磷酸化凋亡蛋白分子Bad在112位點的絲氨酸,使其失活,釋放出抗凋亡蛋白

2、分子Bcl-XL,從而抑制胰腺癌細胞凋亡,促進腫瘤形成。通過RNA干擾技術(shù)(Pim-3 shRNA)瞬時干擾胰腺癌細胞 Pim-3基因表達,可以減弱凋亡分子Bad在112位絲氨酸的磷酸化水平,引起 SubG1期細胞數(shù)目增加和細胞周期遲緩,進一步抑制細胞增殖。然而Pim-3在胃癌中的作用及其機制研究甚少,因此我們進一步探討Pim-3在胃癌中作用的分子機制,為胃癌的靶向治療提供新的思路。
　　【目的】通過檢測胃癌與癌旁組織中Pim-3

3、 mRNA和蛋白來了解Pim-3在胃癌及癌旁組織中的表達差異,通過RNAi技術(shù),敲除胃癌細胞中Pim-3,來探究Pim-3對胃癌細胞增殖、周期、細胞凋亡以及動物皮下腫瘤生長的影響,闡明Pim-3在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用機制,為Pim-3作為胃癌生物靶向治療手段提供理論依據(jù)。
　　【方法】免疫組化檢測人胃癌組織標本中Pim-3表達;定量PCR檢測胃癌組織中的Pim-3 mRNA的表達水平;通過慢病毒感染建立穩(wěn)定干擾Pim-3的胃癌

4、細胞系;western blot檢測胃癌細胞系中Pim-3表達以及信號轉(zhuǎn)導通路上相關(guān)分子的變化; CCK-8試劑盒檢測細胞增殖;流式細胞術(shù)檢測細胞周期和細胞凋亡;克隆形成實驗檢測胃癌細胞克隆形成能力;動物體內(nèi)異種移植瘤實驗檢測細胞體內(nèi)成瘤情況。
　　【結(jié)果】1、胃癌組織中的Pim-3 mRNA和蛋白表達水平明顯高于癌旁組織。2、成功的構(gòu)建了穩(wěn)定敲除Pim-3的胃癌細胞株。3、敲除Pim-3能顯著抑制胃癌細胞的增殖、克隆形成、周期進

5、程并促進細胞的凋亡。4、敲除Pim-3的胃癌細胞株在裸鼠皮下成瘤能力明顯小于對照組。5、敲除Pim-3后,胃癌細胞中的細胞周期和細胞凋亡的相關(guān)蛋白分子Cdc25C, cyclin B1,phospho-p21T145, Bcl-XL和 P-Bad112的蛋白表達也降低。
　　【結(jié)論】胃癌中Pim-3過度表達,促進細胞的增殖、周期進程并且抑制細胞的凋亡,最終促進了胃癌的發(fā)生發(fā)展,因此開發(fā)針對Pim-3的靶分子有望成為新的胃癌靶向治療