強(qiáng)骨寶對(duì)去卵巢大鼠原發(fā)性膝骨關(guān)節(jié)炎模型的作用機(jī)制.pdf

1、目的：
　　建立去卵巢大鼠原發(fā)性膝骨關(guān)節(jié)炎模型，觀察強(qiáng)骨寶對(duì)模型鼠關(guān)節(jié)軟骨退變及局部的炎癥反應(yīng)的作用并探討其作用機(jī)制，為強(qiáng)骨寶治療中老年女性原發(fā)性膝骨關(guān)節(jié)炎提供參考。
　　方法：
　　1.去卵巢大鼠原發(fā)性膝骨關(guān)節(jié)炎模型的建立與鑒定SPF級(jí)SD大鼠24只，6月齡，雌性，隨機(jī)分為空白對(duì)照組(Normal Group，NOR)，單純跑步組(Run Group，RUN)，去卵巢組（Ovariectomized Group，OV

2、X），模型組(Model Group，MOG)，每組6只?？瞻讓?duì)照組常規(guī)飼養(yǎng)不做任何處理，單純跑步組常規(guī)飼養(yǎng)并行疲勞性跑臺(tái)訓(xùn)練，去卵巢組行卵巢切除術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)，模型組卵巢切除術(shù)后行疲勞性跑臺(tái)訓(xùn)練。實(shí)驗(yàn)操作方案:去卵巢方案均采用腹中線入路，沿腹壁探查雙側(cè)卵巢組織，在距離卵巢組織0.5 cm處結(jié)扎子宮，剪去卵巢及其周圍脂肪組織;跑臺(tái)訓(xùn)練方案采用-15°下坡訓(xùn)練，1W適應(yīng)性訓(xùn)練結(jié)束后，頻率固定為28 m/min，60 min/d，6d/W，連

3、續(xù)訓(xùn)練6W。收集24 h尿液，離心后取上清液，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血，離心后取血清，ELISA法檢測(cè)血清中E2、尿液中CTX-Ⅱ含量;取雙膝關(guān)節(jié)股骨髁部行石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下采用軟骨Mankin評(píng)分，觀察關(guān)節(jié)軟骨形態(tài)學(xué)變化，鑒定膝骨關(guān)節(jié)炎模型。
　　2.強(qiáng)骨寶作用機(jī)制研究6月齡SPF級(jí)SD雌鼠24只，分為空白對(duì)照組(NormalGroup，NOR)，模型對(duì)照組(Model Group，MOG)，強(qiáng)骨寶治療組(Observatio

4、n Group，OBG)，陽(yáng)性對(duì)照組(Positive Control Group，PCG)，每組6只?？瞻讓?duì)照組常規(guī)飼養(yǎng)不做任何處理，模型對(duì)照組給予雙蒸水灌胃，強(qiáng)骨寶組給予濃度為1 g/ml的強(qiáng)骨寶溶液灌胃，陽(yáng)性對(duì)照組給予濃度為0.5 g/ml筋骨痛消丸溶液灌胃。給藥標(biāo)準(zhǔn)為0.5 ml/100 g，按當(dāng)日體重計(jì)算出給藥量，每日兩次，連續(xù)4W。給藥治療4W后，收集24 h尿液，離心后取上清液，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血，離心后取血清，灌洗法取雙側(cè)膝

5、關(guān)節(jié)液，離心后取上清，ELISA法檢測(cè)尿液CTX-Ⅱ、血液中E2、關(guān)節(jié)液中TNF-α、IL-1β含量;取雙膝關(guān)節(jié)股骨髁及關(guān)節(jié)囊滑膜組織，行石蠟包埋切片，HE染色，觀察形態(tài)學(xué)改變，統(tǒng)計(jì)軟骨Mankin評(píng)分及滑膜炎癥程度。
　　結(jié)果：
　　1.模型鑒定結(jié)果:行去卵巢術(shù)的大鼠，術(shù)后體重增長(zhǎng)速度與未未手術(shù)大鼠相比較快，且取材時(shí)可見(jiàn)去卵巢大鼠全部出現(xiàn)子宮萎縮現(xiàn)象;血清E2含量，與空白組及單純跑步組相比，去卵巢組與模型組明顯較低(P＜0

6、.05)，卵巢摘除模型成功。造模6W后尿液CTX-Ⅱ含量及軟骨Mankin評(píng)分，與空白組及單純跑步組相比，去卵巢組與模型組均較高(P＜0.05，P＜0.01)，與去卵巢組相比，模型組較高(P＜0.05)，模型組Mankin評(píng)分已達(dá)關(guān)節(jié)軟骨纖維化損傷程度，模型成功。
　　2.強(qiáng)骨寶作用機(jī)制探討結(jié)果:尿液CTX-Ⅱ含量及軟骨Mankin評(píng)分結(jié)果，與空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組、強(qiáng)骨寶觀察組及陽(yáng)性對(duì)照組均增高(P＜0.01，P＜0.05)

7、，與模型對(duì)照組相比，強(qiáng)骨寶觀察組、陽(yáng)性對(duì)照組均降低(P＜0.05)，強(qiáng)骨寶觀察組與陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。血清E2含量測(cè)定結(jié)果，與空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組、強(qiáng)骨寶觀察組、陽(yáng)性對(duì)照組均降低(P＜0.01)，與模型對(duì)照組相比，強(qiáng)骨寶觀察組增高(P＜0.05)，與強(qiáng)骨寶觀察組相比，陽(yáng)性對(duì)照組降低(P＜0.05)。關(guān)節(jié)液中TNF-α、IL-1β及滑膜炎癥程度評(píng)估結(jié)果，與空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組、強(qiáng)骨寶觀察組及陽(yáng)性對(duì)照組均增高(P＜0.01，

8、P＜0.05)，與模型對(duì)照組相比，強(qiáng)骨寶觀察組、陽(yáng)性對(duì)照組均降低(P＜0.05)，強(qiáng)骨寶觀察組與陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.去卵巢聯(lián)合疲勞性跑臺(tái)訓(xùn)練成功建立原發(fā)性膝骨關(guān)節(jié)炎模型。
　　2.強(qiáng)骨寶具有減緩原發(fā)性膝骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)特別是Ⅱ型膠原降解，延緩關(guān)節(jié)軟骨損傷的作用。
　　3.強(qiáng)骨寶通過(guò)促進(jìn)雌激素的代償性再生，抑制炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β的合成，為關(guān)節(jié)軟骨損傷后的修復(fù)提供一個(gè)良好