卵巢去細(xì)胞生物支架的制備及內(nèi)分泌功能評(píng)估.pdf

1、目的：
　　卵巢早衰患者時(shí)常面臨著過早絕經(jīng)的痛苦，其相關(guān)原因包括先天性和后天性，其中腫瘤相關(guān)的卵巢摘除手術(shù)和放化療損傷較為普遍。目前卵巢早衰的治療手段包括激素替代療法和卵巢冷凍技術(shù)。這些技術(shù)存在著致癌或重新將癌細(xì)胞導(dǎo)入體內(nèi)的風(fēng)險(xiǎn)。近年來，去細(xì)胞技術(shù)被越來越廣泛地應(yīng)用于再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。這項(xiàng)技術(shù)主要通過移除組織中的細(xì)胞組分，保留細(xì)胞外基質(zhì)，為器官再生提供生物支架。本課題組的主要目的為研發(fā)新的異種卵巢去細(xì)胞方案，并評(píng)估其在再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

2、價(jià)值。
　　方法：
　?、湃ゼ?xì)胞流程：首先，卵巢快速凍融三次，并切成約1.5mm的薄片。接著置于含有1％ Triton X-100的去離子水振蕩9小時(shí)，再置于含有0.5% SDS的去離子水中振蕩3小時(shí)。最后，將這些組織置于DNA酶中消化12小時(shí)。⑵卵巢支架組分及微觀結(jié)構(gòu)評(píng)估：使用H&E染色、DAPI熒光染色對(duì)去細(xì)胞生物支架的細(xì)胞組分殘留進(jìn)行分析。使用阿辛藍(lán)染色、免疫組化染色分別對(duì)去細(xì)胞支架中的糖胺聚糖、膠原蛋白、纖維蛋白、層

3、粘連蛋白進(jìn)行定性分析。使用DNA、糖胺聚糖、膠原蛋白試劑盒對(duì)上述物質(zhì)在去細(xì)胞支架中的含量進(jìn)行定量分析。通過掃描電鏡對(duì)去細(xì)胞支架微觀結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。⑶卵巢去細(xì)胞支架的生物安全性鑒定：通過CCK-8、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)、大鼠皮下移植對(duì)去細(xì)胞支架的生物安全性進(jìn)行評(píng)估。⑷去細(xì)胞支架內(nèi)分泌功能的評(píng)估：使用大鼠卵巢組織與去細(xì)胞卵巢組織構(gòu)建共培養(yǎng)體系，評(píng)估卵巢顆粒細(xì)胞在去細(xì)胞支架上的浸潤(rùn)和內(nèi)分泌功能。
　　結(jié)論：
　　研發(fā)了一套針對(duì)豬卵巢的去細(xì)胞