Tim-1、Tim-3在過敏性紫癜患兒Th1-Th2、Th17-Treg細胞失衡中的作用.pdf

1、目的：探討過敏性紫癜（Henoch-Schonlein purpura,HSP）急性期患兒體內(nèi)T細胞免疫球蛋白與黏蛋白結(jié)構(gòu)域(T cell immunoglobulin and mucin domain containing molecules,Tim)家族中Tim-1、Tim-3表達水平的變化以及二者在HSP急性期發(fā)病機制中可能的作用，為從Tim-1、Tim-3角度進一步認識HSP發(fā)病機制提供實驗依據(jù)；探討Tim-1、Tim-3在HS

2、P急性期 Th1/Th2細胞、Th17/Treg細胞失衡中的免疫調(diào)節(jié)作用，為進一步闡明 Th1/Th2細胞、Th17/Treg細胞失衡的分子機制之一提供實驗依據(jù)。
　　方法：將2014年7月至2015年5月來四川省人民醫(yī)院兒科就診的HSP患兒中初次發(fā)病的45例兒童納入實驗組，同一時間段內(nèi)來醫(yī)院兒?？企w檢的45例健康兒童納入對照組。在本研究中，采用密度梯度離心法從外周血中分離單個核細胞（PBMC），Trizol法從外周血單個核細胞（

3、PBMC）中提取總RNA，然后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA；目的基因Tim-1 mRNA、Tim-3mRNA以及RORγT mRNA的表達水平通過SYBR?Premix Ex TaqTM II熒光定量PCR測定；血清中細胞因子IFN-γ，IL-4，IL-10和IL-17A的濃度通過ELISA法測定；T細胞亞群中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞（Treg細胞）的表達水平通過流式細胞技術(shù)測定。
　　結(jié)果：HSP組中，目的基因的相對表達水平Tim-1

4、 mRNA（1.33±0.261）、Tim-3 mRNA（1.53±0.247）與RORγt mRNA（0.81±0.097）明顯高于對照組Tim-1 mRNA（0.83±0.254）、Tim-3 mRNA（0.67±0.104）、RORγt mRNA（0.51±0.167）（p＜0.01）。HSP組血清中細胞因子 IL-4（44.52±16.66 pg/ml）、IL-17A（58.32±14.53 pg/ml）的水平高于對照組IL-4

5、（18.32±5.43 pg/ml）、IL-17A（31.79±12.80 pg/ml）（P＜0.01），而HSP組血清中細胞因子IFN-γ（32.96±15.14 pg/ml）、IL-10（14.60±6.44 pg/ml）的水平低于對照組IFN-γ（49.82±20.60 pg/ml）、IL-10（21.78±7.42 pg/ml）（P＜0.01）。HSP組 CD4+CD25+Treg水平（6.95±2.33％）較對照組（10.06

6、±1.63%）降低（P＜0.01）。在HSP組中，目的基因Tim-1 mRNA的相對表達水平與細胞因子IL-4呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.398（P＜0.01），與細胞因子IFN-γ、CD4+CD25+Treg細胞表達水平呈負相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.453（P＜0.01）、-0.365（P＜0.05），而與IL-17A與 RORγt mRNA無相關(guān)性，其相關(guān)系數(shù)分別為0.229（p=0.13＞0.05）、0.087（P=0.571＞0.0

7、5）。在HSP組中，目的基因Tim-3 mRNA的相對表達水平與CD4+CD25+Treg細胞以及細胞因子IL-4的表達水平呈正相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)分別為0.404（P＜0.01）、0.626（P＜0.01），而與細胞因子 IFN-γ、IL-17A以及轉(zhuǎn)錄因子 RORγt mRNA的表達水平呈負相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)分別為-0.611（P＜0.01）、-0.478（P＜0.01）、-0.321（P＜0.05）。
　　結(jié)論：1）HSP急性期患

8、兒體內(nèi)血清IFN-γ表達水平下調(diào)，IL-4表達水平上調(diào)，提示存在以Th2細胞活化為主的Th1/Th2細胞失衡；Th17型細胞因子IL-17A以及其特異性轉(zhuǎn)錄因子 RORγt mRNA表達水平升高，IL-10以及CD4+CD25+Treg細胞的表達水平降低，提示HSP急性期患兒體內(nèi)存在以Th17活化為主Th17/Treg細胞失衡。2）HSP急性期患兒外周血單個核細胞中目的基因Tim-1mRNA、Tim-3 mRNA的表達均升高，提示Tim

9、-1、Tim-3可能在HSP急性期的發(fā)病機制中發(fā)揮作用。3）目的基因Tim-1 mRNA的相對表達水平與IL-4呈正相關(guān)，與IFN-γ、CD4+CD25+Treg細胞表達水平呈負相關(guān)；目的基因Tim-3 mRNA的相對表達水平與IL-4、CD4+CD25+Treg細胞表達水平呈正相關(guān)，與IFN-γ、IL-17A以及轉(zhuǎn)錄因子RORγt mRNA的表達水平呈負相關(guān)，提示：在HSP急性期患兒體內(nèi)，Tim-1、Tim-3分子可能參與了Th1/T