共振光散射技術(shù)測(cè)定HRP及磁性納米粒子的制備應(yīng)用.pdf

1、DNA雜交檢測(cè)及免疫分析在生命科學(xué)研究中具有重要的意義，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)研究、醫(yī)學(xué)診斷等方面。隨著生命科學(xué)的迅速發(fā)展，已有方法如放射性標(biāo)記、酶標(biāo)法等的局限性已日益顯露出來(lái)，研究普遍適用性好、操作簡(jiǎn)便、靈敏度高的DNA雜交檢測(cè)及免疫檢測(cè)新方法顯得越來(lái)越迫切。本文對(duì)共振光散射技術(shù)測(cè)定HRP及磁性納米粒子的制備進(jìn)行了研究。主要內(nèi)容包括：
　　 第一部分是測(cè)定生化分析中常用的一種標(biāo)記物-辣根過(guò)氧化物酶（HRP），原理是HRP催化H2O2

2、氧化四甲基聯(lián)苯胺（TMB）生成大分子聚合物并產(chǎn)生強(qiáng)烈的共振光散射，由此建立了操作簡(jiǎn)單快速、高靈敏度測(cè)定HRP的新方法。探討了酸度、TMB濃度、H2O2濃度、溫度等對(duì)散射信號(hào)的影響。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)定HRP的線性范圍為1×10-7～1×10-6 g/L，最低檢出限為1.8×10-8g/L。
　　 第二部分以1，6-己二胺為氨基功能化試劑，利用水熱-溶劑熱的技術(shù)，一步合成了帶有氨基功能團(tuán)、在水溶液中分散較好、尺寸合適的Fe3O4納

3、米粒子。
　　 第三部分發(fā)現(xiàn)Fe3O4納米粒子能夠催化H2O2氧化四甲基聯(lián)苯胺生成藍(lán)色物質(zhì)，當(dāng)加入硫酸終止反應(yīng)后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，最大吸收峰在450 nm處，且吸收峰強(qiáng)度與Fe3O4濃度成正比關(guān)系，應(yīng)用這一現(xiàn)象我們?cè)O(shè)計(jì)利用固相雜交技術(shù)實(shí)現(xiàn)間接測(cè)定特定的DNA序列的含量。以標(biāo)記特定序列寡聚核苷酸的磁性納米粒子為探針，通過(guò)雜交反應(yīng)生成三明治復(fù)合體，其中Fe3O4納米粒子的量與待測(cè)靶序列的寡聚核苷酸濃度成正比，然后用紫外分光光度法測(cè)