胚胎停育絨毛組織中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：
　　1.檢測胚胎停育患者和正常早孕者絨毛組織中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與DNMT3L mRNA及蛋白的表達(dá)量及陽性染色定位；
　　2.分析胚胎停育患者和正常早孕者絨毛組織中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與DNMT3L在mRNA水平及蛋白水平的表達(dá)差異并探討其臨床意義。
　　方法：隨機(jī)選取2013年1月至2014年6月在青島市市立醫(yī)院婦產(chǎn)科門診就診的經(jīng)B型超聲（B超）證實(shí)為胚胎停止發(fā)育實(shí)行清

2、宮術(shù)的40例患者為觀察組，并選擇同時期40例正常早孕而要求終止妊娠者作為對照組，獲取兩組患者絨毛組織進(jìn)行研究。
　　1.采用實(shí)時定量PCR（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）法檢測兩組患者絨毛組織中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與DNMT3L mRNA的相對表達(dá)量。
　　2.用免疫組織化學(xué)中鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法（SP法）確定DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與

3、DNMT3L蛋白在兩組絨毛組織滋養(yǎng)細(xì)胞中的染色定位，并用圖像分析軟件Image-Pro Plus6.0檢測4種蛋白在絨毛組織中的表達(dá)量。
　　3.用Western Blot方法進(jìn)一步檢測DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與DNMT3L蛋白在兩組患者絨毛組織中的表達(dá)。
　　4.應(yīng)用SPSS17.0軟件對RT-qPCR、免疫組織化學(xué)及Western Blot所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4、>　　結(jié)果：
　　1.兩組絨毛組織均表達(dá)DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與DNMT3L，此外，無論在mRNA水平或蛋白水平，DNMT3B表達(dá)量都顯著高于其他三種DNMTs。
　　2.在mRNA水平，與對照組相比，胚胎停育患者絨毛組織中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與DNMT3L的表達(dá)量均無明顯改變，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3.在蛋白水平，免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，在兩組絨毛組織中，四種DN

5、MTs均呈不同程度陽性染色，DNMT1與DNMT3L陽性染色定位在絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，DNMT3A與DNMT3B陽性染色定位在細(xì)胞核。此外，通過圖像分析軟件及Western Blot結(jié)果顯示，胚胎停育患者絨毛中的DNMT3A蛋白的表達(dá)量明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與DNMT3L四種蛋白之間表達(dá)量無明顯關(guān)聯(lián)（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.胚