TGF-β1和E-Cad在胚胎停育絨毛組織中的表達(dá)變化及臨床意義.pdf

1、背景與目的：
　　胚胎停止發(fā)育（early embryonic death）是指孕早期因某種因素或多種因素共同作用引起胚胎發(fā)育停止導(dǎo)致胚胎死亡,最終導(dǎo)致流產(chǎn),是流產(chǎn)前的病理過(guò)程。彩超檢查提示妊娠囊內(nèi)胎芽或胎兒形態(tài)不整，無(wú)胎心搏動(dòng)，或表現(xiàn)為枯萎卵。胚胎停育是一種常見(jiàn)的早期病理妊娠，其結(jié)局常為稽留流產(chǎn)或不全流產(chǎn)，危害育齡期婦女生殖健康，妊娠年齡推遲，給患者及家屬帶來(lái)了一定的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和心理負(fù)擔(dān)，再次妊娠胚胎停育的風(fēng)險(xiǎn)增加可能導(dǎo)致惡性循環(huán)

2、。胚胎停育在育齡期婦女妊娠中發(fā)病率為15-30％，且近年來(lái)有增加趨勢(shì)。目前認(rèn)為胚胎停育的常見(jiàn)致病因素為染色體、感染、有毒物質(zhì)接觸、年齡、內(nèi)分泌、免疫等，但據(jù)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道約40-50%的胚胎停育原因不明。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)胚胎在著床過(guò)程中絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞對(duì)子宮內(nèi)膜的侵襲深度及絨毛內(nèi)血管的生成與妊娠早期胚胎早期停育、流產(chǎn)等病理妊娠的發(fā)生密切相關(guān)。
　　早期妊娠過(guò)程中滋養(yǎng)細(xì)胞對(duì)子宮肌層的適度浸潤(rùn)是妊娠成功的關(guān)鍵，而轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（Tran

3、sforming growth factor-β1，TGF-β1）和E-鈣黏蛋白（E-cadherin，E-cad）在其過(guò)程中發(fā)揮重要作用?，F(xiàn)有文獻(xiàn)認(rèn)為，TGF-β1可能通過(guò)調(diào)節(jié)妊娠期體內(nèi)Th1/Th2型細(xì)胞因子的平衡、下調(diào)TIMP-1和MMP9產(chǎn)生抑制滋養(yǎng)細(xì)胞過(guò)度侵襲以及免疫抑制作用來(lái)維持母胎界面的免疫耐受狀態(tài)參與胚胎停止發(fā)育；E-cad是一種廣泛表達(dá)于上皮細(xì)胞膜表面鈣依賴(lài)的粘附分子，介導(dǎo)的粘附系統(tǒng)是已被公認(rèn)的“侵潤(rùn)抑制系統(tǒng)”，其在絨

4、毛各部位的表達(dá)逐漸下降，有利于滋養(yǎng)細(xì)胞的侵入子宮肌層完成著床。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)表明，在體內(nèi)TGF-β1可以利用smad依賴(lài)和非smad依賴(lài)的信號(hào)通道使E-Cad的表達(dá)下降，從而破壞細(xì)胞間的粘附屏障。綜上所述，有理由設(shè)想，在胚胎絨毛組織中，某種原因?qū)е碌腡GF的下調(diào)，進(jìn)而TGF通過(guò)各種途徑上調(diào)了 E-cad，二者共同參與了胚胎停育的發(fā)生發(fā)展。本課題擬采用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）及免疫組化，檢測(cè)妊娠早期胚胎停育絨毛組織和妊

5、娠早期正常胚胎絨毛組織中TGF-β1和E-Cad表達(dá)情況，分析兩組之間TGF-β1和E-Cad表達(dá)的差異，探討TGF-β1和E-Cad在早期妊娠胚胎停止發(fā)育機(jī)制中的作用，為孕早期胚胎停育的發(fā)病機(jī)制研究提供一種新的思路和一定的理論依據(jù)。
　　方法：
　　對(duì)在我院隨機(jī)收集的30例妊娠早期胚胎停育絨毛組織和30例妊娠早期正常胚胎絨毛組織。
　　1.采用 Real-time PCR技術(shù)，檢測(cè)兩組絨毛組織中TGF-β1mRNA和

6、E-Cad mRNA表達(dá)情況。
　　2.采用免疫組織化學(xué)技術(shù)（免疫過(guò)氧化物酶法）檢測(cè)兩組絨毛組織中TGF-β1和E-Cad蛋白的細(xì)胞定位及表達(dá)情況。
　　3.采用 SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，定量資料采用 t檢驗(yàn)，定性資料的比較采用卡方檢驗(yàn)，兩定量資料的相關(guān)性分析采用pearson檢驗(yàn)，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果
　　1.30例妊娠早期胚胎停育組和30例妊娠早期正常胚胎組患者的年齡、孕次

7、、孕囊大小、停經(jīng)天數(shù)（P＞0.05）；
　　2.TGF-β1mRNA在兩組絨毛組織中均有表達(dá)，胚胎停育組TGF-β1mRNA表達(dá)量顯著低于正常對(duì)照組（t=2.8592, p＜0.05）；
　　3.E-CadmRNA在兩組絨毛組織中均有表達(dá)，胚胎停育組E-CadmRNA表達(dá)量明顯高于正常對(duì)照組（t=6.024, p＜0.05）；
　　4.TGF-β1蛋白在兩組絨毛組織中滋養(yǎng)層細(xì)胞均有不同程度的陽(yáng)性表達(dá)，主要定位于滋養(yǎng)細(xì)胞

8、細(xì)胞質(zhì)，TGF-β1蛋白在胚胎停育組中的陽(yáng)性表達(dá)率（33.3%）顯著低于正常對(duì)照組(70%)（χ2=8.076,P＜0.05）；
　　5.E-Cad在兩組絨毛組織中滋養(yǎng)層細(xì)胞均有不同程度的陽(yáng)性表達(dá)，主要定位于滋養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞膜，E-Cad蛋白在胚胎停育組中的陽(yáng)性表達(dá)率（50%）顯著高于正常對(duì)照組(30%)（χ2=5.934,P＜0.05）；
　　6.在正常對(duì)照組絨毛組織中均有TGF-β1蛋白和E-Cad蛋白表達(dá)，正常早孕期絨毛組

9、織中 TGF-β1蛋白和 E-Cad蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，關(guān)聯(lián)系數(shù) r=0.215，（χ2=8.231，P＜0.05）；
　　7.在胚胎停育絨毛組織中均有TGF-β1蛋白和E-Cad蛋白表達(dá)，早孕期胚胎停育絨毛組織中 TGF-β1蛋白和 E-Cad蛋白二者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，關(guān)聯(lián)系數(shù) r=0.470，（χ2=8.523，P＜0.05）。
　　結(jié)論
　　1.胚胎停育患者絨毛組織中TGF-β1的表達(dá)量下降，E-Cad的表達(dá)量升高，二