穴位埋線、穴位注射對(duì)2型糖尿病大鼠胰腺衍生因子促凋亡途徑的影響.pdf

1、目的:
　　2型糖尿病對(duì)人類健康構(gòu)成巨大威脅，其具有危害大、難根治、費(fèi)用高的特點(diǎn)，是當(dāng)前我國(guó)第四位致死原因。而胰島β細(xì)胞功能障礙是2型糖尿病發(fā)病的中心環(huán)節(jié)。如何保護(hù)胰島β細(xì)胞功能是治療2型糖尿病的關(guān)鍵，對(duì)于預(yù)防糖尿病及其并發(fā)癥具有重要意義。本文利用高脂高糖飼料加小劑量鏈脲佐菌素復(fù)制2型糖尿病動(dòng)物模型，研究穴位注射、穴位埋線對(duì)2型糖尿病大鼠空腹血糖、體重、血清胰島素、胰島素敏感指數(shù)、及胰腺衍生因子(PANDER)促凋亡途徑的干預(yù)作用

2、，探討穴位注射、穴位埋線保護(hù)胰島β細(xì)胞功能的機(jī)制，從分子水平研究其對(duì)2型糖尿病的作用機(jī)制，為穴位埋線和穴位注射治療2型糖尿病及臨床篩選治療方法提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　將50只雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分成普食組和造模組。普食組用普通飼料喂養(yǎng)，造模組用高糖高脂飼料喂養(yǎng)，喂養(yǎng)4周后，造模組大鼠按體重35mg/kg右側(cè)腹腔注射鏈脲佐菌素復(fù)制2型糖尿病大鼠動(dòng)物模型。在造模同時(shí)，普食組注射等量檸檬酸緩沖液，72小時(shí)后測(cè)

3、量各組大鼠空腹血糖，體重，血糖值大于或等于11.1mmol/L為2型糖尿病大鼠，將造模成功的大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、穴位注射組、穴位埋線組，同時(shí)將普食組大鼠作為正常對(duì)照組。穴位埋線組予雙側(cè)足三里、三陰交、胃脘下俞埋線，每周一次，連續(xù)治療4周，穴位注射組在相同穴位注射參麥注射液，隔日一次，連續(xù)治療14次，共4周。正常組和模型組大鼠不予治療，但兩組大鼠相同時(shí)間，相同方法抓取固定。治療4周后，觀察各組大鼠的血糖、血清胰島素、胰島素敏感指

4、數(shù)。胰腺切片作HE染色，觀察胰島形態(tài)學(xué)變化。采用real time PCR檢測(cè)各組大鼠胰腺組織PANDERmRNA、p21 mRNA、Caspase-3mRNA表達(dá)，western blot檢測(cè)PANDER蛋白、P21蛋白、Caspase-3蛋白的表達(dá)。對(duì)上述結(jié)果進(jìn)行綜合統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠基本生化資料:
　　(1)造模組大鼠經(jīng)用高脂高糖飼料喂養(yǎng)4周后，體重與空白對(duì)照組相比明顯升高(P＜0.01)，

5、注射鏈脲佐菌素72時(shí)后，造模組體重與空白對(duì)照組相比明顯降低(P＜0.05)。
　　(2)從空腹血糖水平看，治療前穴位埋線組、穴位注射組和模型組空腹血糖均顯著高于正常對(duì)照組，但3組之間血糖無顯著性差異。治療后穴位埋線組、穴位注射組空腹血糖顯著低于模型組(P＜0.01)，2組比較有顯著性差異;提示穴位埋線、穴位注射均有降低血糖的作用。穴位注射組空腹血糖低于穴位埋線組，2組比較有顯著性差異(P＜0.01)，提示穴位注射組降低血糖的作用優(yōu)

6、于穴位埋線組。
　　(3)血清胰島素水平顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清胰島素水平顯著上升(P＜0.01)，與模型組比較，穴位埋線組及穴位注射組大鼠血清胰島素水平降低(P＜0.01)，與穴位埋線組比較，穴位注射組血清胰島素水平降低(P＜0.01)，提示穴位注射、穴位埋線可有效降低2型糖尿病大鼠血清胰島素水平，穴位注射對(duì)降低2型糖尿病大鼠血清胰島素作用優(yōu)于穴位埋線。
　　(4)從胰島素敏感指數(shù)水平看，與正常組比較，模型組

7、大鼠胰島素敏感指數(shù)水平明顯降低(P＜0.01)，提示模型組具有胰島素抵抗。與模型組比較，穴位埋線組、穴位注射組胰島素敏感指數(shù)升高(P＜0.01)，提示穴位注射、穴位埋線均可改善2型糖尿病大鼠胰島素抵抗，與穴位埋線組比較，穴位注射組胰島素敏感指數(shù)升高(P＜0.01)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示穴位注射對(duì)改善2型糖尿病大鼠胰島素抵抗作用優(yōu)于穴位埋線。
　　2.相同視野的光學(xué)顯微鏡下，穴位埋線和穴位注射組大鼠胰腺組織內(nèi)的胰島細(xì)胞損傷明顯少于模型

8、組，穴位注射組大鼠胰腺組織內(nèi)的胰島細(xì)胞損傷少于穴位埋線組。
　　3.各組大鼠胰腺組織PANDERmRNA表達(dá)的影響:與正常組比較，模型組胰腺組織PANDERmRNA表達(dá)上升，差異有顯著性意義(P＜0.01）;與模型組比較，穴位埋線組與穴位注射組胰腺組織PANDER mRNA的表達(dá)降低，差異有顯著性意義(P＜0.01);與穴位埋線組比較，穴位注射組胰腺組織PANDERmRNA表達(dá)降低，差異有顯著性意義(P＜0.01）。
　　4

9、.各組大鼠胰腺組織PANDER蛋白表達(dá)的影響:與正常組比較，模型組胰腺組織PANDER蛋白表達(dá)上升，差異有顯著性意義（P＜0.01）;與模型組比較，穴位埋線組與穴位注射組胰腺組織PANDER蛋白表達(dá)下降，差異有顯著性意義(P＜0.01）;與穴位埋線組比較，穴位注射組胰腺組織PANDER蛋白表達(dá)下降，差異有顯著性意義(P＜0.01）。
　　5.各組大鼠胰腺組織p21mRNA表達(dá)的影響:與正常組比較，模型組胰腺組織p21mRNA表達(dá)下

10、降，差異有顯著性意義(P＜0.01）;與模型組比較，穴位埋線組與穴位注射組胰腺組織p21 mRNA表達(dá)升高，差異有顯著性意義（P＜0.01）;與穴位埋線組比較，穴位注射組胰腺組織p21 mRNA表達(dá)升高，差異有顯著性意義(P＜0.01)。
　　6.各組大鼠胰腺組織p21蛋白表達(dá)的影響:與正常組比較，模型組胰腺組織P21蛋白表達(dá)下降，差異有顯著性意義(P＜0.01);與模型組比較，穴位埋線組與穴位注射組胰腺組織P21蛋白表達(dá)上升，差

11、異有顯著性意義(P＜0.01);與穴位埋線組比較，穴位注射組胰腺組織P21蛋白表達(dá)上升，差異有顯著性意義(P＜0.01)。
　　7.各組大鼠胰腺組織Caspase-3mRNA表達(dá)的影響:與正常組比較，模型組胰腺組織Caspase-3mRNA表達(dá)上升，差異有顯著性意義(P＜0.01）;與模型組比較，穴位埋線組與穴位注射組胰腺組織Caspase-3mRNA表達(dá)下降，差異有顯著性意義(P＜0.01）;與穴位埋線組比較，穴位注射組胰腺組織

12、Caspase-3mRNA表達(dá)下降，差異有顯著性意義(P＜0.01)。
　　8.各組大鼠胰腺組織Caspase-3蛋白表達(dá)的影響:與正常組比較，模型組胰腺組織Caspase-3蛋白表達(dá)上升，差異有顯著性意義(P＜0.01);與模型組比較，穴位埋線組與穴位注射組胰腺組織Caspase-3蛋白表達(dá)下降，差異有顯著性意義(P＜0.01）;與穴位埋線組比較，穴位注射組胰腺組織Caspase-3蛋白表達(dá)下降，差異有顯著性意義(P＜0.01)

13、。
　　結(jié)論:
　　1.穴位埋線、穴位注射能有效降低血糖，改善2型糖尿病大鼠胰島β細(xì)胞形態(tài)和分泌功能，增加胰島素的敏感性，起到治療2型糖尿病的作用。
　　2.2型糖尿病胰島素抵抗致使機(jī)體在餐后長(zhǎng)時(shí)間處于高血糖狀態(tài)，激活了β細(xì)胞內(nèi)的PANDER基因表達(dá)與分泌，同時(shí)胰島素抵抗時(shí)，β細(xì)胞代償性增殖，其分泌代償性增多，所以胰島素分泌增加。由于PANDER和胰島素同時(shí)分泌，所以胰島β細(xì)胞分泌的PANDER水平也會(huì)相應(yīng)增加，PAN

14、DER的生理功能是促進(jìn)胰島β細(xì)胞凋亡，而PANDER誘導(dǎo)β細(xì)胞凋亡的機(jī)制主要表現(xiàn)為Caspase-3的激活及p21表達(dá)的抑制。過多表達(dá)分泌的PANDER激活Caspase-3表達(dá)，過表達(dá)的Caspase-3抑制p21表達(dá)，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，損傷胰島β細(xì)胞功能，加重2型糖尿病的進(jìn)程。
　　3.穴位注射、穴位埋線或許通過降低血糖，從而抑制高血糖對(duì)胰島β細(xì)胞PANDER基因轉(zhuǎn)錄的激活，減少胰腺組織PANDER表達(dá)，促進(jìn)p21表達(dá)，抑制C