二十碳五烯酸玻璃體內(nèi)注射對兔眼視覺誘發(fā)電位及視網(wǎng)膜電圖的影響及在兔眼玻璃體內(nèi)的藥代動力學過程.pdf

1、第一部分：二十碳五烯酸玻璃體內(nèi)注射對兔眼視覺誘發(fā)電位及視網(wǎng)膜電圖的影響
　　目的：前期研究已證實玻璃體內(nèi)注射二十碳五烯酸（EPA）濃度0.01g/L時可延緩糖尿病性視網(wǎng)膜病變的進展，對視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞有保護作用，此實驗擬驗證不同濃度 EPA玻璃體內(nèi)注射對視覺誘發(fā)電位及視網(wǎng)膜電圖的影響，確定前述EPA治療濃度是否安全，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：24只新西蘭白兔隨機分為4組，每組6只（12只眼），右眼為實驗眼，玻璃體內(nèi)分

2、別注射0.01mg（0.1ml）、0.1mg（0.1ml）、1.0mg（0.1ml）EPA及0.1％DMSO（0.1ml），左眼為對照眼，玻璃體內(nèi)注射0.1ml生理鹽水。注射后第1、3、7、14天行雙眼視覺誘發(fā)電位（VEP）檢查，記錄不同視角P100潛伏期的變化，及視網(wǎng)膜電圖（ERG）檢查，記錄視桿細胞反應(yīng)（Rod-R）及最大混合反應(yīng)（Max-R）b波振幅的變化，應(yīng)用SPSS軟件對結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。
　　結(jié)果：0.01mg、0.

3、1mg、1.0mgEPA及0.1%DMSO的實驗組（各6只眼）分別與對照組（各6只眼）各時間點1°視角及30′視角視覺誘發(fā)電位P100潛伏期及視網(wǎng)膜電圖Rod-R及Max-R的b波振幅均無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　第二部分：兔眼玻璃體內(nèi)注射二十碳五烯酸的藥代動力學過程
　　目的：研究玻璃體內(nèi)注射 EPA的藥代動力學過程，為臨床給藥周期提供理論依據(jù)。
　　方法：新西蘭白兔30只，雌雄不限，體重2.5-3.0kg，

4、隨機分為標準及質(zhì)控組3只及實驗組27只兔。實驗組再隨機分為9組，每組3只。標準及質(zhì)控組動物無需手術(shù)操作，用于制備空白及質(zhì)控玻璃體樣品；實驗組動物前房穿刺抽取適量房水后，玻璃體內(nèi)注射EPA0.1ml（EPA濃度為0.01mg/0.1ml）。分別于玻璃體內(nèi)注藥后5、30、90、150、240、390、510、690、720min處死動物，立即摘取雙側(cè)眼球制備玻璃體樣本。應(yīng)用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC-MS/MS）檢測玻璃體內(nèi)EPA

5、濃度。用DAS軟件計算主要的藥代動力學參數(shù)。
　　結(jié)果：本實驗條件 EPA與內(nèi)標（格列喹酮）峰形良好，空白玻璃體的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾二者測定。EPA保留時間為1.94min左右，內(nèi)標的保留時間為0.75min左右。兔眼玻璃體注入 EPA后體內(nèi)過程符合有滯后時間的二室模型。EPA的濃度在0.0200~5.00μg/g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r）在0.9972~0.9981之間，典型回歸方程為：Y=0.405×C+0.00152（

6、r=0.9972，n=8）。低、中、高三個濃度水平質(zhì)控（QC）樣品的提取回收率分別為（105.6±6.9）%、（102.3±2.3）%和（94.6±2.1）%。內(nèi)標的提取回收率為（91.6±3.6）%。定量下限（LLOQ）及低、中、高3個濃度水平的QC樣品日內(nèi)RSD分別為10.7%、7.0%、2.1%和2.2%，日間RSD分別為14.0%、11.6%、5.2%和4.1%，準確度分別為96.0%、97.9%、96.6%和102.7%。EP