蝦肝腸胞蟲的流行病學(xué)及其致對(duì)蝦生長(zhǎng)緩慢機(jī)理的探索.pdf

1、近些年來(lái)，東南亞的養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)蝦生長(zhǎng)緩慢的現(xiàn)象被越來(lái)越多的報(bào)道出來(lái)。在這些生長(zhǎng)較為緩慢的對(duì)蝦肝胰腺中檢測(cè)到了蝦肝腸胞蟲(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)陽(yáng)性。目前認(rèn)為EHP是影響對(duì)蝦生長(zhǎng)緩慢的最主要的病原，成為對(duì)蝦養(yǎng)殖的最大威脅之一，嚴(yán)重影響了對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的產(chǎn)量增長(zhǎng)，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本研究通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查，不同組織EHP載量與對(duì)蝦生長(zhǎng)參數(shù)分析，血淋巴ATP含量測(cè)定、蛋白質(zhì)濃度測(cè)定，原位雜交等技術(shù)手段，旨在

2、了解EHP的流行情況及在對(duì)蝦體內(nèi)的分布情況，探索EHP導(dǎo)致凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)生長(zhǎng)停滯或緩慢的機(jī)制。
　　對(duì)來(lái)自河北黃驊(HH)、山東平度(PD)、江蘇吳江(WJ)和山東日照(RZ)的4個(gè)凡納濱對(duì)蝦群體進(jìn)行了對(duì)蝦生長(zhǎng)參數(shù)測(cè)量，用TaqMan qPCR檢測(cè)了各群體對(duì)蝦的肝胰腺組織中和RZ群體對(duì)蝦的多種組織中的EHP感染載量。結(jié)果表明，在主要生長(zhǎng)相關(guān)參數(shù)上RZ群體最優(yōu)，該群體EHP量也最低。不同群體的

3、樣本數(shù)-EHP對(duì)數(shù)直方圖的模式存在差異，HH和PD群體的EHP對(duì)數(shù)呈雙峰分布，而WJ和RZ群體的EHP對(duì)數(shù)呈單峰分布，代表EHP在不同群體中可能存在不同的傳播模式。EHP對(duì)數(shù)呈單峰分布的群體或從多峰分布的群體中分離出的高EHP對(duì)數(shù)子群體的對(duì)蝦體長(zhǎng)或體重與EHP對(duì)數(shù)呈顯著的負(fù)相關(guān)性。在群體水平上EHP顯著增加體重指數(shù)的變異系數(shù)。
　　為進(jìn)一步了解凡納濱對(duì)蝦EHP陽(yáng)性個(gè)體中，EHP的分布情況，對(duì)來(lái)自山東日照的一批凡納濱對(duì)蝦共48尾，解

4、剖對(duì)蝦后分別對(duì)肝胰腺、腸道、肌肉、血淋巴和鰓五種組織進(jìn)行了EHP的Taqman實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示群體中各個(gè)體不同組織中EHP從高到低的順序依次是肝胰腺>中腸>血淋巴>鰓>肌肉。肝胰腺、中腸和鰓三個(gè)組織中EHP對(duì)數(shù)相互間的相關(guān)性呈99.9％的極顯著水平(P＜0.001)；除了中腸與血淋巴和肝胰腺與血淋巴以外，其余組織間EHP對(duì)數(shù)的相關(guān)性也達(dá)到極顯著(P＜0.01)或顯著(P＜0.05)水平。在腸道和鰓組織中EHP拷貝數(shù)對(duì)數(shù)與對(duì)

5、蝦體重指數(shù)(Ponderal index,Pi)有一定的負(fù)相關(guān)性，并且肌肉中EHP平均載量最低。
　　通過(guò)對(duì)血淋巴和肌肉組織進(jìn)行蛋白質(zhì)含量、血淋巴ATP含量的測(cè)定，及與EHP載量和對(duì)蝦生長(zhǎng)參數(shù)的相關(guān)性的分析，可見(jiàn)肌肉蛋白含量與血淋巴、肌肉EHP載量對(duì)數(shù)達(dá)到95%的負(fù)相關(guān)水平。血淋巴中的ATP濃度與血淋巴中和肝胰腺中的EHP載量均呈現(xiàn)出顯著的負(fù)相關(guān)性，與5種組織EHP載量之和對(duì)數(shù)達(dá)到99.5%的負(fù)相關(guān)性水平。經(jīng)過(guò)SigmaPlot1

6、2.0回歸分析，得到血淋巴ATP含量與所有組織中EHP載量之和對(duì)數(shù)的關(guān)系式為：ATP濃度=-(0.060±0.019)Log(EHP載量)+(2.326±0.238)。證明EHP的確通過(guò)截取宿主的ATP而影響對(duì)蝦的生長(zhǎng)的機(jī)制，并從一定程度上影響了對(duì)蝦肌肉蛋白的積累。
　　為尋找EHP在對(duì)蝦體內(nèi)分布的直接證據(jù)，依據(jù)GenBank中公布的EHP SSU rDNA序列(KF362129)，設(shè)計(jì)了一對(duì)原位雜交探針的PCR擴(kuò)增引物，用DIG

7、標(biāo)記的EHP探針對(duì)肝胰腺、肌肉、鰓、腸道組織的原位雜交顯示，肝胰腺是主要的EHP感染組織，其他組織中雜交信號(hào)較弱，但各組織中有少數(shù)細(xì)胞的EHP感染。
　　本研究通過(guò)qPCR獲得了EHP在凡納濱對(duì)蝦不同群體和不同組織中感染量的準(zhǔn)確數(shù)據(jù)，觀察到群體中不同個(gè)體的EHP感染發(fā)生在較接近的時(shí)間點(diǎn)時(shí)，其EHP載量與對(duì)蝦的生長(zhǎng)參數(shù)呈顯著的負(fù)相關(guān)性，群體內(nèi)的EHP感染會(huì)顯著增加體重指數(shù)的變異系數(shù)；EHP能在多組織中檢出，肝胰腺和中腸中分布最多，原