藍(lán)狐(Alopex lagopus)膽汁藥性物質(zhì)的鑒定及膽汁藥用作用的研究.pdf

1、動(dòng)物膽汁藥用在中國已有3000多年的歷史，歷代本草書籍中收錄記載的膽汁藥用動(dòng)物有30多種。動(dòng)物膽汁中的藥性成分主要是膽汁酸，已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥等領(lǐng)域。尤其是熊膽汁中的熊去氧膽酸(UDCA)和?；切苋パ跄懰?TUDCA)，能有效溶解膽結(jié)石，且為熊膽汁的主要藥用成分。最近一些年來，由于活熊取膽有悖于動(dòng)物福利理念，養(yǎng)熊業(yè)正遭到公眾的抵制，但人們對(duì)熊膽的需求并無縮減。因此，尋找熊膽藥品的替代品已成為學(xué)術(shù)界和中國社會(huì)的迫切需要。
　　動(dòng)物膽

2、汁酸的研究雖然已經(jīng)很深入，但人們始終沒有找到含有UDCA或TUDCA的理想對(duì)象。牛膽、豬膽、羊膽、雞膽、蛇膽、魚膽等雖然也有類似物質(zhì)，但均與熊膽成分藥性有一定差距，而無法成為替代。究其原因，可能是這些動(dòng)物的食性、分類或生理特征都與熊類的相差甚遠(yuǎn)。熊類雖然是雜食動(dòng)物，但仍然偏向于動(dòng)物性食物，其膽汁物質(zhì)的生成與作用必然有別于純草食性動(dòng)物（如:豬、牛、羊）的膽汁物質(zhì)。
　　藍(lán)狐(Alopex lagopus)是北極狐在人工圈養(yǎng)下的經(jīng)濟(jì)野

3、生動(dòng)物，食性以動(dòng)物性飼料（如:魚類）為主，也喂食少量谷物，與養(yǎng)殖熊的飼料相似。人類養(yǎng)殖藍(lán)狐已有100多年的歷史，但利用目標(biāo)主要是其毛皮。中國目前每年生產(chǎn)藍(lán)狐皮約1000萬張，取皮后的尸體和內(nèi)臟多被廢棄，意味著每年要浪費(fèi)1000多萬個(gè)膽囊。藍(lán)狐膽汁中含有什么物質(zhì)？是否具有類似熊膽汁成分的高藥性物質(zhì)？至今仍無人開展詳細(xì)的研究與分析。在這樣的大背景下，探索藍(lán)狐的膽汁藥性不僅具有很強(qiáng)的理論意義，而且具有極大的生產(chǎn)實(shí)踐和社會(huì)意義，能為尋找熊膽替代

4、品提供新的思路與途徑，這也是本研究的主要原因。
　　動(dòng)物膽汁酸有許多類別，而本文主要研究的成分有兩種:一是游離型的UDCA，另一是結(jié)合型的TUDCA。這兩種物質(zhì)都是熊膽汁中的有效藥用成分，對(duì)于治療肝損傷具有明顯的療效，也是人們追逐熊膽的目地。為了尋找這兩類物質(zhì)，本文同時(shí)使用了兩種有效的方法，即:薄層色譜法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)。前者能定性鑒別UDCA，后者可定量TUDCA。為了探研藍(lán)狐膽汁物質(zhì)的藥用價(jià)值，本文采用了

5、三種肝損傷模型，即:四氯化碳(CCL4)肝損傷模型、D-半乳糖鹽酸鹽(D-Galn)肝損傷模型及酒精肝損傷模型。最后通過二甲苯抗炎模型及抗菌實(shí)驗(yàn)，證明藍(lán)狐膽汁具有的抗炎、抑菌能力。
　　通過上述研究設(shè)計(jì)，本論文主要獲得了以下研究結(jié)果:
　　1.運(yùn)用直觀和顯微鑒定方法，對(duì)30只飼養(yǎng)藍(lán)狐的新鮮膽、干燥膽及膽汁粉的物理特征進(jìn)行了觀察和描述。發(fā)現(xiàn)，新鮮的藍(lán)狐膽每個(gè)平均重約平均重為3.70±0.25g;每個(gè)膽囊平均含膽汁2.15±0.

6、35g。晾干后的膽囊平均重1.50±0.20g;干燥后的膽汁粉為黃棕色，有光澤，易碎，每個(gè)膽囊平均含干膽汁粉約0.82±0.30g。膽粉結(jié)晶為不規(guī)則形，無偏光，有紋理，與熊膽粉鏡下結(jié)構(gòu)相似。
　　2.采用TLC法，對(duì)藍(lán)狐膽汁粉中的成分進(jìn)行了定性分析。發(fā)現(xiàn)，藍(lán)狐膽汁中存在三類物質(zhì)，其中兩類與熊膽汁中的相同，并可鑒定出其中一類為UDCA。熊膽汁中也存在三類物質(zhì)。藍(lán)狐膽汁成分與熊膽汁成分的相似度為50％。
　　3.利用HPLC法，

7、對(duì)藍(lán)狐膽汁粉中的成分進(jìn)行了定性與定量分析。發(fā)現(xiàn)，藍(lán)狐膽汁與熊膽汁有10類共同物質(zhì)，其中一類可鑒定為TUDCA。此外，藍(lán)狐膽汁共有13類物質(zhì)，熊膽汁共有約20類物質(zhì)。進(jìn)一步，經(jīng)計(jì)算得到每250.00mg藍(lán)狐膽汁的干燥粉末中含有33.41mg的?；切苋パ跄懰徕c，而每250.00mg引流熊膽的干燥粉末中含有?；切苋パ跄懰徕c59.88mg，運(yùn)用UPLC-Q-TOF/MS（高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜法）同樣檢測(cè)到UDCA及TUDCA。
　　4.借鑒

8、經(jīng)典的CCL4、 D-Galn及酒精性肝損傷造模方法，各對(duì)五組（其中一組為非損傷的空白組）小鼠進(jìn)行了肝損傷實(shí)驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)，四組被CCL4或D-Galn或酒精損傷了肝以后的小鼠，血液中AST（谷草轉(zhuǎn)氨酶）、ALT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）、T-CHO（總膽固醇）、以及肝組織MDA（丙二醛）濃度都明顯增高，模型組與空白組差異明顯(P＜0.05)。
　　5.三個(gè)模型實(shí)驗(yàn)均發(fā)現(xiàn)，無論是高、低劑量，投喂藍(lán)狐膽汁粉的小鼠AST、ALT、T-CHO、MDA四個(gè)

9、指標(biāo)均出現(xiàn)了明顯下降(P＜0.05)，說明藍(lán)狐膽汁有效降低了這四個(gè)指標(biāo)的濃度。這三個(gè)組與空白組對(duì)比時(shí)，CCL4肝損傷模型實(shí)驗(yàn)中MDA含量無顯著差異，D-Galn肝損傷模型實(shí)驗(yàn)中高劑量組的MDA含量無顯著差異，說明藍(lán)狐膽至少能使這種物質(zhì)恢復(fù)正常。
　　6.三個(gè)藥物組（護(hù)肝片、高、低劑量藍(lán)狐膽汁）之間的指標(biāo)絕對(duì)數(shù)值存在差異，反映其療效差別為:陽性組＞高劑量組＞低劑量組。組織切片之間的形態(tài)差異揭示了小鼠肝損傷后的組織病變，也證明了三個(gè)藥

10、物組之間的療效差別。不過，在D-Galn肝損傷模型實(shí)驗(yàn)中，使MDA恢復(fù)正常時(shí)，高劑量的藍(lán)狐膽汁似乎比護(hù)肝片更有療效。
　　7.二甲苯經(jīng)典抗炎模型揭示，尤以藍(lán)狐膽汁高劑量組有較好的抗炎效果。
　　8.鋼管體外抑菌實(shí)驗(yàn)方法，發(fā)現(xiàn):三個(gè)不同劑量藍(lán)狐膽汁，對(duì)金黃葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大腸桿菌(Escherichia coli)、變形桿菌(Proteus sp.)、枯草芽孢桿菌(Bacillus su

11、btilis)均有明顯的抑制作用，并隨使用劑量的加大，抑菌效果隨之增強(qiáng)。藍(lán)狐膽汁對(duì)大腸桿菌的抑制作用最強(qiáng)，其次是金黃色葡萄球菌，再次是變形桿菌。對(duì)比之下，對(duì)枯草芽孢桿菌的抑制效果較差。
　　本文的創(chuàng)新性點(diǎn):使用TLC和HPLC法對(duì)藍(lán)狐膽汁進(jìn)行分析，為進(jìn)一步研究提供了方法參考;發(fā)現(xiàn)藍(lán)狐膽汁中存在UDCA和TUDCA，為熊膽汁藥品替代提供了新的思路;對(duì)藍(lán)狐膽汁酸的藥性進(jìn)行分析，證明了藍(lán)狐膽汁護(hù)肝、抗炎抑菌作用，為空白的藍(lán)狐膽開發(fā)提供研