RLT介導(dǎo)金納米棒-多西他賽脂質(zhì)體的制備及體內(nèi)研究.pdf

1、研究目的：制備長(zhǎng)徑比可控的金納米棒（AuNRs），研究其在腫瘤光熱治療方面的作用。制備RLT介導(dǎo)的靶向納米載體給藥系統(tǒng)，將具有熱療作用的金納米棒和化療藥多西他賽包載于脂質(zhì)體內(nèi)，對(duì)RLT介導(dǎo)的金納米棒/多西他賽脂質(zhì)體（AuNRs/DTX-LNC-RLT）進(jìn)行理化性質(zhì)評(píng)價(jià)及荷瘤小鼠藥效學(xué)、體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)特性、組織分布進(jìn)行研究。
　　研究方法：
　?。?）采用制備工藝簡(jiǎn)單的種子生長(zhǎng)法合成了金納米棒，分別通過(guò)離心的方法對(duì)AuNRs進(jìn)

2、行分離和純化；通過(guò)紫外分光光度計(jì)（UV）掃描AuNRs的特征吸收光譜；透射電子顯微鏡（TEM）觀察AuNRs的形態(tài)；激光納米粒度儀測(cè)定AuNRs的電位和粒徑值；電感耦合等離子發(fā)射光譜儀（ICP）測(cè)定其濃度。
　?。?）采用薄膜分散法制備AuNRs/DTX脂質(zhì)體，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)將RLT多肽連接到脂質(zhì)體上，制備RLT介導(dǎo)的包載AuNRs和DTX的脂質(zhì)納米載體給藥系統(tǒng)。分別采用激光納米粒度儀對(duì)其粒徑和電位進(jìn)行分析；TEM觀察其外貌和形態(tài)；

3、采用HPLC對(duì)其含藥量和包封率進(jìn)行測(cè)定。
　?。?）藥動(dòng)學(xué)和組織分布研究，動(dòng)物尾靜脈注射給藥后，采用HPLC測(cè)定動(dòng)物體內(nèi)血漿和各組織的藥物濃度；應(yīng)用藥動(dòng)學(xué)軟件PK Solver進(jìn)行房室模型擬合及藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的計(jì)算。
　?。?）藥效學(xué)研究：通過(guò)建立 PC-3腫瘤裸鼠模型，將具有熱療、化療和靶向功能的脂質(zhì)體作用于荷瘤鼠，通過(guò)腫瘤體積和抑瘤率評(píng)價(jià)其熱療和化療的協(xié)同作用；采用活體成像儀考察脂質(zhì)納米載體在體內(nèi)的靶向性；通過(guò)對(duì)裸鼠心、肝、

4、脾組織的HE染色切片評(píng)價(jià)其毒性。
　　研究結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)制備的金納米棒的橫向LSPR峰位于510nm左右，縱向LSPR峰位于810nm左右；AuNRs的長(zhǎng)徑比（AR）約為4.06；AuNRs的粒徑和電位分別為42.45nm±1.86nm和12.5±2.64mV；AuNRs的濃度為0.551 nM；TEM顯示AuNRs呈圓柱狀，長(zhǎng)短和大小都比較均一。通過(guò)薄膜分散法制備的AuNRs/DTXLNC-RLT平均粒徑為214.51±7.58n

5、m，電位為-23.3±3.20mV，包封率為95.45％±0.86和含量為1.38±0.24mg.mL-1；AuNRs/DTXLNC-RLT的TEM顯示其基本呈圓球形、形態(tài)比較均一。藥動(dòng)學(xué)結(jié)果，DTX溶液組、AuNRs/DTX-LNC和AuNRs/DTXLNC-RLT均符合二室模型，藥時(shí)曲線下的面積（AUC）、消除半衰期（t1/2Beta）和體內(nèi)平均滯留時(shí)間（MRT）分別為：DTX溶液組為13.897±2.933μg/ml*h、1.45

6、3±0.281h、1.451±0.276 h，AuNRs/DTX-LNC組為27.62±2.141μg/ml*h、2.565±0.335 h、3.83±0.087 h，AuNRs/DTXLNC-RLT組為54.17±7.658μg/ml*h、4.725±0.507 h、5.77±0.464 h。組織分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，DTX在體內(nèi)吸收迅速，分布廣泛，在心臟、腎臟和脾臟中分布較多，AuNRs/DTXLNC-RLT在各組織總分布相對(duì)較少，對(duì)各

7、臟器的毒性較小。PC-3荷瘤鼠的活體成像結(jié)果顯示，DiR-LNC-RLT載體具有一定的靶向性，RLT多肽可以識(shí)別前列腺癌細(xì)胞的表面受體，能夠提高藥物在腫瘤組織含量。BALB/c裸鼠體內(nèi)腫瘤抑制率實(shí)驗(yàn)表明，AuNRs/DTXLNC-RLT+Laser組能夠有效抑制腫瘤的生長(zhǎng)，抑瘤率達(dá)到79.42%，較其他治療組有顯著性差異（P<0.05）。裸鼠的體重變化和主要臟器病理形態(tài)學(xué)觀察表明，AuNRs/DTXLNC-RLT制劑的毒性小于DTX。<