Muc1對巨噬細胞功能影響的初步研究.pdf

1、目的：探討香煙煙霧提取物對巨噬細胞表面Muc1表達的影響，及Muc1對巨噬細胞功能的影響，為闡明慢性阻塞性肺疾病的發(fā)病機制提供新的理論依據(jù)，對慢性阻塞性肺疾病的預(yù)防和治療提供一個新的靶點。
　　方法：（1）培養(yǎng)RAW264.7巨噬細胞，分別用0.3％及0.5%香煙煙霧提取物（CSE）刺激3、6、12、24h后，收集細胞蛋白，采用Western-Blot蛋白免疫印跡的方法檢測RAW264.7巨噬細胞Muc1的表達水平。提取并培養(yǎng)小鼠

2、原代巨噬細胞，并用0.5%CSE刺激12h后，收集細胞蛋白，采用Western-Blot蛋白免疫印跡的方法檢測原代巨噬細胞Muc1的表達水平。（2）飼養(yǎng)并繁殖FVB Muc1雜合型（Muc1+/-）、野生型（Muc1+/+）和純合突變基因（Muc1-/-）小鼠，并進行基因型的鑒定。提取并培養(yǎng)Muc1+/+和Muc1-/-基因型的小鼠原代巨噬細胞，觀察兩種基因型的原代巨噬細胞的形態(tài)及生長狀況。將來源于Muc1+/+小鼠和Muc1-/-小鼠

3、的原代巨噬細胞均分為對照組（CTL）和0.5%CSE組共四組，四組處理后加入適量的雞紅細胞來觀察每組吞噬雞紅細胞的能力。原代巨噬細胞分為Muc1+/+組與Muc1-/-組2組進行劃痕實驗，將來源于Muc1+/+小鼠和Muc1-/-小鼠的原代巨噬細胞均分為對照組（CTL）和MCP-1組共四組并應(yīng)用Transwell小室進行遷移實驗，來觀察每組巨噬細胞的遷移情況。
　　結(jié)果：（1）0.3%CSE刺激RAW264.7巨噬細胞3h、6h、

4、12h、24h后分別與對照組相比，Muc1蛋白表達均有上調(diào)趨勢，但無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。0.5%CSE刺激RAW264.7巨噬細胞3h與對照組相比，Muc1蛋白表達有上調(diào)趨勢，但無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；0.5%CSE刺激RAW264.7巨噬細胞6h、12h與對照組相比，Muc1蛋白表達增加，并有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；0.5%CSE刺激24h與對照組相比，Muc1蛋白表達下調(diào)，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。0.5%CS

5、E刺激原代巨噬細胞12h與對照組相比，Muc1蛋白表達增加，并有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。（2）Muc1+/+原代巨噬細胞的0.5%CSE組吞噬雞紅細胞的能力要弱于Muc1+/+原代巨噬細胞的對照組，并有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；Muc1-/-原代巨噬細胞的0.5%CSE組吞噬雞紅細胞的能力與Muc1-/-原代巨噬細胞的對照組基本無差異；Muc1-/-原代巨噬細胞的對照組吞噬雞紅細胞的能力有比Muc1+/+原代巨噬細胞的對照組強的趨

6、勢，但無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；Muc1-/-原代巨噬細胞的0.5%CSE組吞噬雞紅細胞的能力要強于Muc1+/+原代巨噬細胞的0.5%CSE組，并有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。劃痕實驗中發(fā)現(xiàn)Muc1+/+組巨噬細胞遷移的數(shù)目多于Muc1-/-組。遷移實驗中發(fā)現(xiàn)與Muc1+/+原代巨噬細胞的對照組相比，Muc1+/+原代巨噬細胞的MCP-1組巨噬細胞的遷移率較高；與Muc1-/-原代巨噬細胞的對照組相比，Muc1-/-原代巨噬細胞的