香煙煙氣對大鼠肺泡巨噬細胞免疫功能的影響研究.pdf

1、目的：
　　從體內(nèi)和體外兩個方面探討香煙煙氣對大鼠肺泡巨噬細胞免疫功能的影響,為吸煙致肺天然免疫損傷機制研究提供有力的科學依據(jù)。
　　方法：
　　1.體外細胞實驗:分別通過CCK-8法,Annexin-V FITC/PI雙染法和CFSE熒光標記法分析香煙煙氣提取物(CSE)對NR8383細胞的比活力、凋亡和分裂增殖的影響。收集經(jīng)不同濃度CSE處理24h的NR8383細胞,與FITC標記的大腸桿菌共同孵育2h后,用流式細

2、胞儀檢測胞內(nèi)熒光強度,分析CSE對NR8383細胞吞噬功能的影響。經(jīng)不同濃度CSE處理后的NR8383細胞與熒光標記A549細胞共培養(yǎng)24小時,通過流式細胞儀檢測NR8383細胞對A549細胞的生長抑制情況。用2,7-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)染色后,熒光顯微鏡及流式細胞儀檢測不同濃度CSE處理后的NR8383細胞內(nèi)活性氧(ROS)水平,用紫外可見分光光度計檢測胞內(nèi)谷胱甘肽(GSH)水平的變化。
　　2.體內(nèi)動物實驗

3、r>　　選用清潔級 wistar大鼠作為實驗對象,分別設對照組(C組)、低劑量組(L組)、中劑量組(M組)和高劑量組(H組),每組10只動物,染毒18天。觀察大鼠的體重變化,分析血常規(guī)和血生化指標。通過肺灌洗收集大鼠肺泡巨噬細胞,通過流式細胞儀分析肺泡巨噬細胞凋亡、吞噬功能的變化以及具有吞噬功能陽性細胞所占比例。
　　結果：
　　1.體外細胞實驗結果
　　NR8383細胞的吞噬功能隨著CSE濃度的變化而先增強后降低。單

4、獨用CSE處理NR8383細胞,在100μg/mL濃度的CSE作用下,巨噬細胞的吞噬功能與對照組相比提高0.5倍,此時的細胞比活力最高。在CSE和LPS共同作用下,CSE的濃度為100μg/mL時,NR8383細胞的吞噬功能提高到正常水平的3倍。而當CSE濃度達到200μg/mL時,NR8383細胞的吞噬功能降低,細胞凋亡率為54.1％。
　　NR8383細胞對A549細胞的抑制顯示,隨著CSE濃度的升高,抑制作用先增強而后減弱。

5、在50μg/mL的CSE作用下,NR8383細胞對A549細胞的抑制作用最大。
　　胞內(nèi) ROS水平隨著 CSE濃度的升高,ROS水平先升高后下降。在25μg/mL的CSE作用下,胞內(nèi)ROS水平降為對照組的74.32%,而在最高濃度作用下,胞內(nèi)ROS水平是對照組的2.23倍。細胞內(nèi)GSH水平隨著CSE濃度的變化逐漸升高,在100μg/mL濃度時達到最高水平22.6μmol/L,而后隨著CSE濃度的升高呈下降趨勢。
　　2.體

6、內(nèi)動物實驗結果
　　經(jīng)香煙煙氣染毒后,大鼠體重與正常對照組相比呈劑量依賴性下降。大鼠肺泡巨噬細胞的凋亡率與染毒劑量呈正相關(r=0.998)。在較低的煙氣作用下,大鼠肺泡巨噬細胞的吞噬功能與對照組相比有所提高,但中高劑量下,與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義。經(jīng)香煙煙氣刺激后,肺泡巨噬細胞中的具有吞噬功能的陽性細胞所占比例與正常對照組相比明顯升高。血常規(guī)檢驗和血生化部分指標與對照組相比,有統(tǒng)計學意義。
　　結論:
　　1、C