DDR1對大鼠巨噬細胞功能影響的實驗研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　 肺移植已經(jīng)成為治療終末期肺病的一種有效手段，但是和心、腎等實質(zhì)臟器相比，肺移植術(shù)后的慢性排斥反應(yīng)發(fā)生的更早、更多、更嚴重，其中閉塞性細支氣管炎(OB)是導致移植肺慢性功能障礙的主要原因。大量研究發(fā)現(xiàn)圓盤狀受體(DDR)和肺纖維化的發(fā)生密切相關(guān)。同時在肺纖維化病人支氣管肺泡灌洗液里發(fā)現(xiàn)了大量的巨噬細胞，活化的巨噬細胞可以釋放大量的炎癥因子從而加重炎癥反應(yīng)。由于OB和肺纖維化發(fā)生機制上相似，DDR1在OB纖維

2、化發(fā)生中可能起到重要作用。本課題通過RNA干擾抑制大鼠肺巨噬細胞DDR1的表達，來探討DDR1對大鼠肺巨噬細胞功能的影響，為臨床治療OB開辟新途提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 本實驗分為兩部分：
　　 1、研究正常大鼠肺巨噬細胞中DDR1的表達以及膠原對其生物學行為影響：(1)通過流式細胞儀檢測大鼠肺巨噬細胞DDR1的表達水平。(2)觀察膠原刺激激活大鼠肺巨噬細胞對其炎癥因子如IL-6，IL-8，IL-1β，

3、TNF-a釋放能力的影響。
　　 2、干擾DDR1表達對大鼠肺巨噬細胞生物學的行為影響：(1)使用表達大鼠DDR1的DDR1-SiRNA慢病毒轉(zhuǎn)染大鼠肺巨噬細胞。(2)使用膠原激活干擾DDR1表達的大鼠肺巨噬細胞，觀察DDR1對大鼠肺巨噬細胞炎癥因子如IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-a釋放能力的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、大鼠肺巨噬細胞高表達DDR1。
　　 2、成功轉(zhuǎn)染慢病毒的大鼠肺巨噬細胞

4、呈綠色熒光；未轉(zhuǎn)染的細胞中未見綠色熒光。
　　 3、轉(zhuǎn)染DDR1-SiRNA慢病毒后大鼠肺巨噬細胞的DDR1表達水平明顯下降。
　　 4、膠原Ⅳ可以激活大鼠肺巨噬細胞釋放大量炎癥因子（IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-a）；轉(zhuǎn)染DDR1-SiRNA慢病毒后DDR1抑制表達的大鼠肺巨噬細胞炎癥因子釋放能力明顯降低。
　　 結(jié)論：
　　 1、我們構(gòu)建的慢病毒載體大鼠DDR1-SiRNA能有效轉(zhuǎn)染大鼠肺巨

5、噬細胞，且轉(zhuǎn)染后的大鼠肺巨噬細胞DDR1表達受到持續(xù)抑制。
　　 2、Ⅳ型膠原能夠刺激大鼠肺巨噬細胞釋放大量的炎癥相關(guān)因子。
　　 3、慢病毒轉(zhuǎn)染后的大鼠肺巨噬細胞其炎癥相關(guān)因子釋放能力明顯下降。
　　 慢病毒載體的RNA干擾技術(shù)尚處在探索階段，我們嘗試使用其轉(zhuǎn)染巨噬細胞，為RNA干擾技術(shù)在巨噬細胞中的使用提供新的實驗方法。本課題通過RNA干擾來抑制大鼠肺巨噬細胞DDR1的表達，以研究DDR1對肺巨噬細胞功能的影