柴胡總多糖對小鼠巨噬細胞免疫功能的調(diào)節(jié)及其對大鼠急性肺損傷的影響.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)和急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征(ALI/ARDS)是臨床上常見的兩種疾病。SLE是一種累及多系統(tǒng)的自身免疫病,臨床表現(xiàn)復(fù)雜、病程遷延反復(fù),病人常伴有多種異常自身抗體和補體激活,多數(shù)患者最終出現(xiàn)腎功能不全,嚴重影響著患者的生命。ALI/ARDS是在嚴重感染、休克、創(chuàng)傷及燒傷等非心源性疾病過程中,肺毛細血管內(nèi)皮細胞和肺泡上皮細胞損傷造成彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水腫,導(dǎo)致的急性低氧性呼吸功能不全或衰竭。
　　這兩種疾

2、病在一定程度上有共同之處。首先,二者都包括于免疫性疾病的范圍內(nèi),在病變過程中伴有免疫功能的失調(diào);第二,非特異性免疫應(yīng)答發(fā)揮了重要的作用。第三,二者的病程進展中都出現(xiàn)有相關(guān)炎癥因子的大量釋放。
　　柴胡是我國的傳統(tǒng)中藥和常用中藥,包括傘形科多年生草本植物柴胡(北柴胡)BupleurumchinensisDC.和狹葉柴胡(南柴胡)BupleurumscorzonerifoliumWilld,具有抗炎及免疫調(diào)節(jié)的作用。小葉黑柴胡分布于我

3、國西北地區(qū),在過去的研究中,我們從小葉黑柴胡根部提取出了柴胡多糖,并證實(1)小葉黑柴胡總多糖(BPs)對空腸彎曲菌CJ-S13l誘導(dǎo)的系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)樣小鼠有較好的防治作用:抑制了SLE小鼠體液免疫功能亢進,抑制了脾腫大并緩解了腎損傷;(2)在ALI大鼠模型中,初步觀察到小葉黑柴胡總多糖10mg.kg-1能緩解ALI病理損傷,并能抑制補體過度活化和減少肺部組織中補體活化產(chǎn)物的沉積。
　　鑒于以上我們已有的藥效學研究成果,

4、結(jié)合單核巨噬系統(tǒng)在兩種疾病中所起的重要作用,我們觀察柴胡總多糖對以巨噬細胞為代表的小鼠單核巨噬系統(tǒng)的作用,以進一步了解柴胡總多糖對SLE的作用可能的靶點;在大鼠急性肺損傷模型上,觀察柴胡總多糖對其的保護作用的具體機制。
　　1柴胡總多糖對小鼠巨噬細胞免疫功能調(diào)節(jié)的作用目的研究小葉黑柴胡總多糖對小鼠腹腔巨噬細胞功能的影響。方法小鼠隨機分組,小葉黑柴胡總多糖(BPs20、40、80.mg.kg-1·d-1)、醋酸潑尼松(Prednis

5、one3mg·kg-1·d-1)或左旋瞇唑(Levamisole25mg.kg-1·d-1)灌胃給藥(day0-day6),觀察小葉黑柴胡總多糖對小鼠腹腔巨噬細胞功能的影響。檢測內(nèi)容包括檢測藥物對巰乙醇酸鈉誘導(dǎo)的小鼠活化巨噬細胞吞噬自身凋亡細胞、抗體介導(dǎo)的綿羊紅細胞(SRBC)和雞紅細胞(CRBC)功能的影響;Griess法檢測藥物對巰乙醇酸鈉誘導(dǎo)的活化巨噬細胞和細菌脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的炎性巨噬細胞培養(yǎng)上清一氧化氮(NO)水平的影響;

6、ELISA法檢測藥物對活化和炎性巨噬細胞培養(yǎng)上清中腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素1β(IL-1β)和白細胞介素-6(IL-6)水平的影響。
　　結(jié)果柴胡80mg.kg-1·d-1提高了活化巨噬細胞對自身凋亡細胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)(P＜O.001,p＜0.01)。柴胡20、40和80mg.kg-1·d-1顯著提高了活化巨噬細胞對抗體介導(dǎo)的綿羊紅細胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)(P＜0.001);顯著促進了活化巨噬細胞對雞紅細胞

7、的吞噬百分率(p＜0.05)和吞噬指數(shù)(P＜0.01)。柴胡20、40、80mg·kg-1·d-1顯著抑制了活化巨噬細胞分泌NO和IL-6的水平(P＜0.001),但對活化巨噬細胞分泌TNF-α和IL-1β的水平無影響;與活化巨噬細胞相比,LPS刺激的炎性巨噬細胞分泌NO、TNF-α和IL-1β的水平明顯升高(P＜0.01)。柴胡40、80mg.kg-1.d-1,顯著降低了炎性巨噬細胞分泌NO、TNF-α和IL-1β的水平(P＜0.00

8、1)。柴胡20、40、80mg.kg-1.d-1降低了炎性巨噬細胞分泌IL-6的水平(P＜0.001)。
　　結(jié)論柴胡總多糖對小鼠腹腔巨噬細胞的功能有調(diào)節(jié)作用:促進了小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬能力(吞噬自身抗原、吞噬IgG調(diào)理的綿羊紅細胞,吞噬雞紅細胞):對活化巨噬細胞釋放細胞因子的影響較輕,但對炎性巨噬細胞釋放的過量的NO、TNF-α、IL-1β和IL-6有顯著抑制作用。2柴胡總多糖對大鼠急性肺損傷的作用
　　目的研究小葉黑柴

9、胡總多糖對大鼠急性肺損傷的保護作用及作用機制。方法大鼠隨機分為偽手術(shù)組(sham)、造模組(model)、柴胡組(BPs2.5,5,10,20mg-kg-1,ig)及陽性藥對照組(地塞米松磷酸鈉,Dexamethasone2mg.kg-1,ip)。通過缺血再灌注和內(nèi)毒素氣道滴注建立大鼠ALI模型。肺組織作病理切片,HE染色觀察大鼠病變及給藥后改善狀況;測定大鼠肺濕干重比;考馬斯亮藍法測定肺泡支氣管灌洗液(BALF)中蛋白含量;計數(shù)BAL

10、F內(nèi)中性粒細胞含量;測定BALF中MPO含量;ELISA法測定BALF中細胞因子IL-6,和TNF-α含量;通過溶血實驗測定血清總補體水平。
　　結(jié)果缺血再灌注聯(lián)合LPS滴注可成功誘導(dǎo)出大鼠急性肺損傷模型。與偽手術(shù)組相比,模型組大鼠出現(xiàn)明顯的肺部損傷,病理切片可見大量出血、肺泡壁增厚和肺泡變形塌陷;肺濕干重比,BALF液中性粒細胞數(shù),MPO,蛋白含量,TNF-α,IL-6和血清總補體活性等都有顯著的增高(P＜0.001)?？诜o藥

11、后,柴胡明顯改善了病理損傷,病理切片顯示給藥后炎癥程度明顯減輕,肺泡腔出血明顯減少,肺泡壁變薄,炎性細胞浸潤減少。柴胡10和20mg.kg-1顯著降低了濕干重的比例(P＜0.05)。柴胡各劑量組BALF中蛋白和TNF-α水平顯著下降(P＜0.01):柴胡5、10和20mg.kg-1減少了BALF中性粒細胞數(shù)、抑制MPO和IL-6水平的升高(P＜0.001);柴胡20mg·kg-1降低了大鼠血清中補體經(jīng)典途徑的激活水平。(p＜0.05)。