蘆筍多糖對巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)研究.pdf

1、植物多糖是一類廣泛存在于植物中具有多種生物學(xué)活性的天然大分子物質(zhì)，大量的藥理和臨床研究表明，植物多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗炎癥、抗病毒、抗輻射、降血糖等多種功能。其中有關(guān)植物多糖的免疫調(diào)節(jié)活性倍受關(guān)注，是當(dāng)前多糖研究最活躍的領(lǐng)域之一。 研究表明，植物多糖能在多條途徑、多個(gè)層面對免疫系統(tǒng)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，不僅能夠激活T、B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等免疫細(xì)胞，還能活化補(bǔ)體，促進(jìn)細(xì)胞因子生成等，對免疫系統(tǒng)產(chǎn)生多方面調(diào)節(jié)作用，尤其

2、是對巨噬細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能的影響。巨噬細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)中的重要成員之一，作為免疫效應(yīng)細(xì)胞廣泛參與免疫應(yīng)答反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)植物多糖激活巨噬細(xì)胞釋放活性氧、分泌細(xì)胞因子和趨化因子等是其發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的重要方式。 蘆筍(Asparagus officinalis．L)是一種質(zhì)地優(yōu)良、營養(yǎng)豐富的保健型蔬菜，研究發(fā)現(xiàn)蘆筍提取物具有抗癌、降血脂、增強(qiáng)免疫功能、抗衰老等藥理作用。蘆筍多糖是蘆筍含有的重要活性物質(zhì)之一。本實(shí)驗(yàn)以蘆筍為原料從中分離

3、提取多糖，研究蘆筍多糖對小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7免疫活性的影響及作用機(jī)制，以期對蘆筍多糖的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制進(jìn)行深入研究，為蘆筍多糖開發(fā)提供理論依據(jù)。 首先，新鮮蘆筍原料鼓風(fēng)干燥，粉碎得到蘆筍干粉；蘆筍干粉采用熱水浸提法提取蘆筍粗多糖，得率為8.5％；分別采用Sevage法、酶結(jié)合Sevage法、三氯乙酸法去蛋白處理，多糖得率分別為1.5％、2.2％、3.6％。三氯乙酸去除蛋白后的粗多糖經(jīng)不同濃度乙醇分級得三種多糖樣品，分別為E4

4、0、E60、E80，其中E60組分得率最高，得到0.426克，E60經(jīng)DEAE52纖維素柱層析，得到兩種層析樣品：A、B，對層析樣品A進(jìn)行紅外光譜分析和原子力顯微鏡形貌觀察。 其次采用Griess法測定蘆筍多糖對小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7產(chǎn)生NO的影響。結(jié)果顯示，各組分多糖均可促進(jìn)小鼠巨噬細(xì)胞釋放NO，在一定濃度范圍內(nèi)(50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml)，隨著多糖濃度增加，刺激作用增強(qiáng)，呈劑

5、量依賴關(guān)系；隨著作用時(shí)間的延長，其刺激效應(yīng)也增強(qiáng)，呈現(xiàn)時(shí)間依賴性。采用DAF-FM DANO熒光探針檢測細(xì)胞內(nèi)部產(chǎn)生的NO，激光共聚焦顯微鏡下觀察，結(jié)果表明多糖作用6h細(xì)胞內(nèi)部即產(chǎn)生NO。巨噬細(xì)胞釋放的NO作為重要的生物活性分子廣泛參與生理和病理過程，可殺傷微生物(細(xì)菌、真菌、病毒)、寄生蟲和腫瘤細(xì)胞等，保護(hù)機(jī)體抵御外界不利因素的侵害。同時(shí)采用MTT法檢測多糖對巨噬細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果顯示不同組分蘆筍多糖可促進(jìn)巨噬細(xì)胞的增殖，表明蘆筍多