糖尿病大鼠肺泡巨噬細(xì)胞功能變化及胰島素治療的影響.pdf

1、肺臟作為糖尿病損害的靶器官本世紀(jì)70年代以來才逐漸被大家關(guān)注，廣泛涉及肺功能、生化代謝、肺組織病理等諸多方面，其中肺局部防御功能降低所致下呼吸道感染最為常見。以前研究表明各種細(xì)菌病毒及其它病原體引起肺炎發(fā)病率及死亡率增加的相關(guān)危險因素。肺泡巨噬細(xì)胞廣泛分布于肺泡內(nèi)及支氣管表面，是肺組織接觸抗原最早機(jī)會最多的免疫細(xì)胞，組成肺組織的第一道防線，能夠比其他細(xì)胞更有效地清除細(xì)菌、病毒、真菌感染．作為組織特異性的肺泡巨噬細(xì)胞其變化的具體機(jī)制目前尚

2、不清楚，本文復(fù)制糖尿病動物模型，通過支氣管肺泡灌洗直接獲得肺泡巨噬細(xì)胞觀察不同病程中其吞噬及釋放細(xì)胞因子IL-1β、IL-12、TNF-α及NO功能變化，進(jìn)一步觀察胰島素治療及體外高糖環(huán)境對其影響。因此從細(xì)胞及分子生物學(xué)水平探討糖尿病肺防御功能減弱的發(fā)生機(jī)制，為糖尿病肺感染的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律及其防治提供依據(jù)。 材料與方法: 1、材料 鏈脲左菌素，大鼠白介素1β(IL-1β)、白介素12(IL-12)腫瘤壞死因子(T

3、NF-α)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，NO測定試劑盒，中效重組人胰島素，血糖儀。 2、方法 動物分組及糖尿病模型的建立：將60只雄性健康wistar大鼠，體重200克左右，隨機(jī)分為5組(每組12只)，正常對照組，糖尿病4周組、8周組、胰島素治療組及體外高糖組。動物禁食16小時，按60mg/kg體重一次性腹腔注射冰浴下新鮮配制的2％STZ枸櫞酸一枸櫞酸鈉緩沖溶液，正常對照組以枸櫞酸一枸櫞酸鈉緩沖溶液代替STZ，體外高糖組動物不

4、予特殊處理直接行支氣管肺泡灌洗獲取肺泡巨噬細(xì)胞，各種處置均所用含葡萄糖糖30mmol/l RPMI1640培養(yǎng)液。肺泡巨噬細(xì)胞的獲取及培養(yǎng)：大鼠用10％水合氯醛麻醉成功后，行氣管插管，經(jīng)氣管插管行支氣管肺泡灌洗(BAL)，共5ml×6，回收BALF，貼壁培養(yǎng)2小時，得純化AM；AM吞噬功能以其對雞紅細(xì)胞吞噬率表示。ELISA法進(jìn)行IL-1β、IL-12、TNF-α檢測； Griess法進(jìn)行N0的檢測；統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS11.5軟件

5、統(tǒng)計(jì)，各組檢測結(jié)果均以x±s表示，各組比較采用方差分析或非參數(shù)檢驗(yàn)(方差齊時采用方差分析，當(dāng)方差不齊時采用非參數(shù)檢驗(yàn))，各組組間兩兩比較采用DUNNETT-t法，各組吞噬率比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 糖尿病4周組、8周組大鼠肺泡巨噬細(xì)胞對雞紅細(xì)胞的吞噬率(7.25±2.49％、5.25±1.83％)顯著低于正常對照組(9.63±2.20％，P(0.01)；糖尿病4周組肺泡巨噬細(xì)胞體外

6、培養(yǎng)液IL-12量(59.48±2.08pg/ml)較正常對照組顯著減少(76.43±1.18pg/ml，P<0.01)；糖尿病8周組IL-12、TNF-α(67.21±2.01pg/ml、350.29±70.10pg/ml)較對照組顯著減少(76.43±1.18pg/ml、475.72±92.6pg/ml，P均<0.05)；糖尿病8周組IL-1β(96.21±8.32pg/ml)較正常對照組顯著升高(77.29±6.41 pg/ml，

7、P<0.01)，糖尿病4周組、糖尿病8周組N0量(32.46±3.16 μ M、28.57±4.73 μ M)顯著高于正常對照組(5.50±0.63 μ M，P均<0.01)。胰島素治療能減弱上述變化趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論: 1、糖尿病大鼠肺泡巨噬細(xì)胞對雞血紅細(xì)胞的吞噬率下降，并隨病程的延長其吞噬率下降明顯，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、糖尿病大鼠肺泡巨噬細(xì)胞體外培養(yǎng)釋放IL-12、TNF-α量減少。 3