糖尿病大鼠肺泡巨噬細胞功能變化及胰島素治療的影響.pdf

1、肺臟作為糖尿病損害的靶器官本世紀70年代以來才逐漸被大家關注，廣泛涉及肺功能、生化代謝、肺組織病理等諸多方面，其中肺局部防御功能降低所致下呼吸道感染最為常見。以前研究表明各種細菌病毒及其它病原體引起肺炎發(fā)病率及死亡率增加的相關危險因素。肺泡巨噬細胞廣泛分布于肺泡內及支氣管表面，是肺組織接觸抗原最早機會最多的免疫細胞，組成肺組織的第一道防線，能夠比其他細胞更有效地清除細菌、病毒、真菌感染．作為組織特異性的肺泡巨噬細胞其變化的具體機制目前尚

2、不清楚，本文復制糖尿病動物模型，通過支氣管肺泡灌洗直接獲得肺泡巨噬細胞觀察不同病程中其吞噬及釋放細胞因子IL-1β、IL-12、TNF-α及NO功能變化，進一步觀察胰島素治療及體外高糖環(huán)境對其影響。因此從細胞及分子生物學水平探討糖尿病肺防御功能減弱的發(fā)生機制，為糖尿病肺感染的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律及其防治提供依據(jù)。 材料與方法: 1、材料 鏈脲左菌素，大鼠白介素1β(IL-1β)、白介素12(IL-12)腫瘤壞死因子(T

3、NF-α)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，NO測定試劑盒，中效重組人胰島素，血糖儀。 2、方法 動物分組及糖尿病模型的建立：將60只雄性健康wistar大鼠，體重200克左右，隨機分為5組(每組12只)，正常對照組，糖尿病4周組、8周組、胰島素治療組及體外高糖組。動物禁食16小時，按60mg/kg體重一次性腹腔注射冰浴下新鮮配制的2％STZ枸櫞酸一枸櫞酸鈉緩沖溶液，正常對照組以枸櫞酸一枸櫞酸鈉緩沖溶液代替STZ，體外高糖組動物不

4、予特殊處理直接行支氣管肺泡灌洗獲取肺泡巨噬細胞，各種處置均所用含葡萄糖糖30mmol/l RPMI1640培養(yǎng)液。肺泡巨噬細胞的獲取及培養(yǎng)：大鼠用10％水合氯醛麻醉成功后，行氣管插管，經(jīng)氣管插管行支氣管肺泡灌洗(BAL)，共5ml×6，回收BALF，貼壁培養(yǎng)2小時，得純化AM；AM吞噬功能以其對雞紅細胞吞噬率表示。ELISA法進行IL-1β、IL-12、TNF-α檢測； Griess法進行N0的檢測；統(tǒng)計學處理：采用SPSS11.5軟件

5、統(tǒng)計，各組檢測結果均以x±s表示，各組比較采用方差分析或非參數(shù)檢驗(方差齊時采用方差分析，當方差不齊時采用非參數(shù)檢驗)，各組組間兩兩比較采用DUNNETT-t法，各組吞噬率比較采用非參數(shù)檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 實驗結果: 糖尿病4周組、8周組大鼠肺泡巨噬細胞對雞紅細胞的吞噬率(7.25±2.49％、5.25±1.83％)顯著低于正常對照組(9.63±2.20％，P(0.01)；糖尿病4周組肺泡巨噬細胞體外

6、培養(yǎng)液IL-12量(59.48±2.08pg/ml)較正常對照組顯著減少(76.43±1.18pg/ml，P<0.01)；糖尿病8周組IL-12、TNF-α(67.21±2.01pg/ml、350.29±70.10pg/ml)較對照組顯著減少(76.43±1.18pg/ml、475.72±92.6pg/ml，P均<0.05)；糖尿病8周組IL-1β(96.21±8.32pg/ml)較正常對照組顯著升高(77.29±6.41 pg/ml，

7、P<0.01)，糖尿病4周組、糖尿病8周組N0量(32.46±3.16 μ M、28.57±4.73 μ M)顯著高于正常對照組(5.50±0.63 μ M，P均<0.01)。胰島素治療能減弱上述變化趨勢，但無統(tǒng)計學差異。 結論: 1、糖尿病大鼠肺泡巨噬細胞對雞血紅細胞的吞噬率下降，并隨病程的延長其吞噬率下降明顯，差別有統(tǒng)計學意義。 2、糖尿病大鼠肺泡巨噬細胞體外培養(yǎng)釋放IL-12、TNF-α量減少。 3