當(dāng)歸補(bǔ)血湯抗血虛組分配伍的探討.pdf

1、當(dāng)歸補(bǔ)血湯（Angelicae blood-supplementing decoction, ABSD）為經(jīng)典的補(bǔ)氣生血名方，出自《內(nèi)外傷辨惑論》。方中僅由黃芪和當(dāng)歸兩味中藥組成，且黃芪用量多于當(dāng)歸，5:1的芪歸比沿用至今，對氣弱血虛證療效最顯著。近年來，盡管 ABSD的經(jīng)典比例和配伍增效作用都得到了藥效學(xué)的證實，但其益氣補(bǔ)血的有效物質(zhì)基礎(chǔ)及其具體的機(jī)制仍缺乏深入闡明。本研究基于已初步明確黃芪和當(dāng)歸的物質(zhì)成分基礎(chǔ)上，從中選擇含量較高且具

2、有一定補(bǔ)血相關(guān)生物活性的有機(jī)成分進(jìn)行組分配伍。通過血虛小鼠模型，比較ABSD和組分配伍（ Ingredient compatibility, IC）抗血虛的作用，并初步探討兩者抗血虛作用的機(jī)制。為進(jìn)一步篩選ABSD的有效主成分和輔成分及優(yōu)化配伍，探討其作用靶點(diǎn)，從藥效學(xué)和藥動學(xué)研究黃芪-當(dāng)歸藥對的配伍增效作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。研究結(jié)果不僅有助于更好地掌握ABSD藥對臨床使用的準(zhǔn)確性和科學(xué)性，使其更好地應(yīng)用于臨床，也有助于更加深入了解中藥復(fù)方

3、的特點(diǎn)和內(nèi)涵。
　　目的：
　　對比ABSD全藥配伍與其組分配伍抗血虛作用的大小，探討ABSD抗血虛的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和其發(fā)揮作用的本質(zhì)。
　　方法：
　　1.在文獻(xiàn)查閱和前期研究的基礎(chǔ)上初步選定當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、黃芪甲苷、阿魏酸、毛蕊異黃酮和芒柄花素為抗血虛的主要藥理活性組分。運(yùn)用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）測定ABSD水煎液（黃芪：當(dāng)

4、歸=5:1）中黃芪甲苷、阿魏酸、毛蕊異黃酮和芒柄花素的含量，為IC研究提供具體的數(shù)值依據(jù)。
　　2.水提醇沉法提取ABSD粗多糖（包含黃芪多糖和當(dāng)歸多糖）；按照黃芪：當(dāng)歸為5:1的比例分別單獨(dú)提取黃芪多糖和當(dāng)歸多糖，對所提粗多糖稱重，分別計算粗多糖的平均收率；分析芪歸比為5:1時所得黃芪粗多糖及當(dāng)歸粗多糖重量比值；苯酚-濃硫酸法測定粗多糖中多糖的百分含量。
　　3.用化學(xué)聯(lián)合損傷法即皮下注射乙酰苯肼和腹腔注射環(huán)磷酰胺建立小鼠

5、血虛模型；按照隨機(jī)分組原則將實驗小鼠分為空白對照、血虛模型、ABSD水煎液和IC高、中、低劑量給藥組（IC包含黃芪多糖、當(dāng)歸多糖、阿魏酸、毛蕊異黃酮、芒柄花素5個組分），共8組。用全自動血液分析儀檢測小鼠外周血中紅細(xì)胞（Red blood cells, RBC）、白細(xì)胞（White blood cells, WBC）、血紅蛋白（Hemoglobin, HGB）、紅細(xì)胞比容（Hematocrit, HCT）和血小板（Platelet, P

6、LT）的變化。
　　4.小鼠采血后立即將其解剖取其心、肝、脾、腎臟和胸腺進(jìn)行稱重，分析各組小鼠臟器重量差異；計算小鼠的脾臟指數(shù)（Spleen index, SI）和胸腺指數(shù)（Thymus index, TI）即臟器重量與每10克小鼠體重的比值（mg/10g）。
　　5.取小鼠脾臟和胸腺，制成石蠟切片，進(jìn)行常規(guī)HE染色，鏡下觀察各組小鼠脾臟和胸腺的組織結(jié)構(gòu)變化。
　　6.取小鼠血清，用酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-li

7、nked immune sorbent assay, ELISA）法測定小鼠血清中促紅細(xì)胞生成素（Erythropoietin, EPO）的含量。
　　結(jié)果：
　　1. HPLC法測得3批ABSD水煎液供試樣品（黃芪：當(dāng)歸=5:1）中黃芪甲苷、阿魏酸、毛蕊異黃酮和芒柄花素的平均含量分別為0.1131 mg/g、0.0442 mg/g、0.022 mg/ g和0.0074 mg/g。
　　2.冷凍干燥法制備的粗多糖肉眼觀

8、察為白色疏松形態(tài)；計算得ABSD粗多糖、黃芪粗多糖和當(dāng)歸粗多糖的平均收率分別為4.94％、3.95%和9.40%；黃芪粗多糖與當(dāng)歸粗多糖的重量比為2:1；苯酚-濃硫酸法測得ABSD粗多糖、黃芪粗多糖和當(dāng)歸粗多糖中多糖的平均含量分別為70.78%、73.02%和72.40%。
　　3.實驗結(jié)果表明ABSD水煎液與IC高、中、低劑量給藥組均能不同程度升高血虛模型小鼠外周血RBC、HGB、HCT和WBC值，降低PLT值。藥效變化率（%）

9、結(jié)果顯示，IC組對血虛小鼠的療效與ABSD水煎液組相似。
　　4.與模型組比，ABSD水煎液與 IC高、中、低劑量給藥組均能不同程度降低血虛小鼠的SI，且IC低劑量組可明顯降低SI（P<0.05）；與模型組比，三個劑量ABSD水煎液及IC給藥組可不同程度升高血虛小鼠的TI，但各組的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　5.鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，三個劑量ABSD水煎液與IC給藥組均能不同程度促進(jìn)免疫器官脾臟和胸腺的組織結(jié)構(gòu)的恢復(fù)。