FOXO1基因參與調(diào)控人肝癌細(xì)胞胰島素抵抗的研究.pdf

1、I?分類號(hào)：分類號(hào)：密級(jí)：密級(jí)：研究生學(xué)位論文研究生學(xué)位論文論文題目（中文）論文題目（中文）FOXO1基因參與調(diào)控基因參與調(diào)控人肝癌細(xì)胞胰島素抵抗肝癌細(xì)胞胰島素抵抗的研究的研究論文題目（外文）論文題目（外文）TheresearchofinsulinresistancefFOXO1geneinvolvedinregulationofhumanlivercancercell研究生姓名研究生姓名連立強(qiáng)連立強(qiáng)學(xué)科、專業(yè)學(xué)科、專業(yè)口腔醫(yī)學(xué)口腔醫(yī)學(xué)

2、口腔臨床醫(yī)學(xué)口腔臨床醫(yī)學(xué)研究方向研究方向口腔頜面外科學(xué)口腔頜面外科學(xué)學(xué)位級(jí)別學(xué)位級(jí)別碩士碩士導(dǎo)師姓名、職稱導(dǎo)師姓名、職稱謝富強(qiáng)謝富強(qiáng)教授教授論文工作論文工作起止年月起止年月2015年07月至月至2016年05月論文提交日期論文提交日期2016年04月論文答辯日期論文答辯日期2016年05月學(xué)位授予日期學(xué)位授予日期III?FOXO1FOXO1基因參與調(diào)控基因參與調(diào)控人肝癌細(xì)胞胰島素抵抗的研究肝癌細(xì)胞胰島素抵抗的研究中文中文摘要摘要目的：目

3、的：本實(shí)驗(yàn)選用人源肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞株，通過高濃度胰島素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞建立HepG2胰島素抵抗模型，分析不同濃度胰島素條件下HepG2肝細(xì)胞對(duì)糖原消耗量，確定胰島素誘導(dǎo)的最佳誘導(dǎo)濃度和時(shí)間，檢測(cè)在不同濃度和時(shí)間的胰島素干預(yù)下，HepG2肝細(xì)胞中FOXO1基因的表達(dá)差異以及FOXO1蛋白的表達(dá)差異，進(jìn)而得出研究FOXO1基因是否參與調(diào)控肝癌細(xì)胞胰島素抵抗。并且利用胰島素增敏藥物吡格列酮降低HepG2細(xì)胞胰島素抵抗程度，再次檢測(cè)He

4、pG2肝細(xì)胞中FOXO1基因的表達(dá)差異以及FOXO1蛋白的表達(dá)差異，反面驗(yàn)證FOXO1基因是否直接調(diào)控參與調(diào)控肝癌細(xì)胞胰島素抵抗。方法：方法：培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞(HepG2)當(dāng)細(xì)胞生長超過培養(yǎng)瓶底面85%以上面積，進(jìn)行傳代，以密度為1105ml分為6組，將細(xì)胞均勻的種植于96孔板中，待細(xì)胞貼壁后，去除培養(yǎng)液中血清成分進(jìn)行培養(yǎng)即為同步化24小時(shí)后，對(duì)每組細(xì)胞使用不同濃度胰島素進(jìn)行干預(yù)，胰島素濃度分別為1105，1106，1107，1108，1

5、109，11010（單位molL)。干預(yù)24小時(shí)后，使用葡萄糖氧化酶過氧化物酶法檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)中葡萄糖含量，用MTT檢測(cè)每孔細(xì)胞含量，標(biāo)化細(xì)胞糖原消耗量，分析最佳濃度。重新將細(xì)胞以密度為1105ml分為3組，接種于96孔板，待細(xì)胞貼壁后，進(jìn)行無血清培養(yǎng)即為同步化24小時(shí)后，對(duì)每組細(xì)胞使用最佳濃度胰島素進(jìn)行干預(yù)，對(duì)每組細(xì)胞分別采用不同時(shí)間進(jìn)行誘導(dǎo)，分別為24h36h48h使用葡萄糖氧化酶過氧化物酶法檢測(cè)各組細(xì)胞中葡萄糖含量，MTT檢測(cè)每

6、孔細(xì)胞含量，標(biāo)化細(xì)胞糖原消耗量。分析最佳時(shí)間。確定最佳時(shí)間，收集細(xì)胞，使用RTPCR技術(shù)檢測(cè)不同胰島素干預(yù)組FOXO1基因表達(dá)，Western印跡法(WB)定量檢測(cè)各組細(xì)胞FOXO1蛋白表達(dá)水平，驗(yàn)證FOXO1與胰島素抵抗的相關(guān)性。用MTT法檢測(cè)吡格列酮對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，選取影響較低的濃度，對(duì)最佳濃度，最佳時(shí)間的胰島素干預(yù)組，分別用不含吡格列酮的培養(yǎng)液和含不同濃度的吡格列酮培養(yǎng)液培養(yǎng)24h，使用葡萄糖氧化酶過氧化物酶法檢測(cè)各組細(xì)胞中葡萄