益生菌干預重癥急性胰腺炎大鼠回腸差異性蛋白研究.pdf

1、目的:通過建立重癥急性胰腺炎大鼠模型，比較急性重癥胰腺炎組、益生菌干預組與假手術組大鼠腸道差異性表達蛋白，篩選特異性表達蛋白為SAP發(fā)生時腸黏膜屏障損傷機制的研究提供依據(jù)，同時也為益生菌預防及治療重癥急性胰腺炎腸粘膜屏障損傷提供新的理論依據(jù)及蛋白分子靶點。
　　方法:(1)54只健康8周齡雄性SD大鼠，體重250～300g，隨機分為3組;假手術組（SO組，n=18）、重癥急性胰腺炎組（SAP組，n=18）、益生菌治療組(YSJ組，

2、n=18)。(2) SO組打開腹腔并翻動胰腺，并關腹。用3％?；悄懰徕c進行SAP大鼠模型制備。YSJ組為SAP大鼠動物建模成功待麻醉清醒后，10％益生菌溶液制劑灌胃，共給藥2次，SAP組大鼠用生理鹽水灌胃2次。(3)三組大鼠在24h時間點處死動物后取胰腺、回腸組織及大鼠腹腔靜脈血標本。(4)胰腺和回腸組織HE染色:胰腺組織使用kusske標準進行病理評分，觀察胰腺損傷程度;回腸組織使用改良的Chiu氏評分法評價腸粘膜損傷程度。(5)采集

3、各組回腸組織標本，提取蛋白，進行蛋白變性、還原及酶解，然后進行iTRAQ標記結(jié)合納升級反相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(nanoRPLC-MS/MS)技術對各組樣本提取的蛋白進行鑒定及生物信息學分析。(6)數(shù)據(jù)整理分析:收集的數(shù)據(jù)運用SPSS統(tǒng)計軟件進行分析，樣本均數(shù)采用方差分析假設檢驗，P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學意義;差異蛋白篩選通過R軟件采用t test計算其顯著性指數(shù)(p-Value)，分別采用p-value＜0.05且Fold chan

4、ge＞1.5或Foldchange＜0.6667進行差異蛋白篩選。
　　結(jié)果:(1)成功制作出SAP大鼠模型，胰腺組織發(fā)生典型病理學改變。(2) SAP組和YSJ組胰腺的病理評分高于假手術組(SO組)(P＜0.05)，YSJ組胰腺病理評分低于SAP組(P＜0.05)。(3) SAP組在回腸組織的病理評分高于SO組(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。YSJ組的病理評分低于SAP組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);(

5、4) SAP組和YSJ組D-乳酸及內(nèi)毒素均高于假手術組(SO組)(P＜0.05)，YSJ組D-乳酸及內(nèi)毒素均低于SAP組(P＜0.05)。(5) SAP組與SO組間共篩選37個顯著差異蛋白，6個蛋白質(zhì)上調(diào)，31個蛋白質(zhì)下調(diào);YSJ組與SO組間共篩選出94個差異蛋白，6個蛋白質(zhì)上調(diào)，88個蛋白質(zhì)下調(diào);在YSJ組與SAP組共同存在7個差異蛋白，分別為閉鎖小帶蛋白1(ZO-1)、腸粘液素樣蛋白(Intestinal mucin-like pr

6、otein)、伴侶蛋白10(Chaperonin10)、胞漿型磷脂酶A2(Cytosolic phospholipaseA2)、結(jié)蛋白(Desmin)、腸凝集素1(Intelectin1)、轉(zhuǎn)膠蛋白(Transgelin)。(7)免疫組化驗證顯示，ZO-1蛋白在SAP組較SO組表達下調(diào)(P＜0.05)，而YSJ組較SAP組表達上調(diào)。
　　結(jié)論:基于iTRAQ技術的差異蛋白研究為SAP腸道黏膜屏障損傷機制的研究提供依據(jù)，同時也能夠較