皺褶念珠菌及其相鄰菌種的系統(tǒng)分類及重命名研究.pdf

1、目的：
　　1.了解目前與皺褶念珠菌（Candida rugosa）相鄰的已知相關菌種之間在分類發(fā)育進化中的關系，進一步為該類菌種的系統(tǒng)分類提供更為準確的依據(jù)。
　　2.探討Candida rugosa及其相鄰菌種Candida pseudorugosa、Candida neorugosa和Candida mesorugosa歸為一類復合種的理論的準確性和合理性。
　　3.結(jié)合念珠菌屬中Candida rugosa等幾

2、類菌種重新歸類為Diutina屬的方案，對過去Candida rugosa及其相鄰菌種種群中菌株的分類位臵進行評估和修正，為今后在分類上鑒定該類未知菌株提供參考。
　　方法：
　　1.挑選Candida rugosa及其相鄰菌株共24株，進行形態(tài)學鑒定。
　　2.生理生化鑒定：對Candida rugosa及其相鄰菌種的標準株進行API20C酵母鑒定系統(tǒng)研究。
　　3.采用美國臨床實驗室標準化研究所（CLSI）制

3、定的M27-A3方案中的酵母菌微量稀釋法，測定臨床分離皺褶念珠菌及其相鄰菌種菌株對兩性霉素B(AMB)、5-氟胞嘧啶(5-FC)、氟康唑(FCZ)和伊曲康唑(ICZ)的敏感性。
　　4.運用多位點序列分型方法（MLST）選取管家基因（ITS，LSU，rpb1，cox2，act1），對24株菌株及一株outgroup模式菌株進行以管家基因的堿基序列分析為依據(jù)的分子分類學研究。
　　結(jié)果：
　　1.供試菌株的形態(tài)學性狀相似

4、，呈奶油狀白色光滑或皺褶菌落、鏡下菌細胞呈橢圓形不規(guī)則排列；科瑪嘉顯色培養(yǎng)基除Candida pseudorugosa為紫綠色外，其余均為藍綠色。
　　2.在API20C酵母菌鑒定系統(tǒng)中，Candida rugosa及其相鄰菌種的菌株可利用碳源種類差異少，不足以從種間水平對其進行分類。
　　3.Candida rugosa、Candida mesorugosa和Candida pseudorugosa對兩性霉素、伊曲康唑、氟

5、康唑和5-氟胞嘧啶均有很高的敏感性；Candida neorugosa對伊曲康唑劑量依賴性型敏感，而對其他三種廣譜抗真菌藥物都敏感。
　　4.MLST所得到的系統(tǒng)發(fā)育樹與基于ITS單基因序列構建的系統(tǒng)發(fā)育樹相比，在種內(nèi)菌株親緣關系的分化差異程度高，具有明顯的分類多樣性。通過MLST所得復合基因系統(tǒng)發(fā)育樹上24株供試菌株呈明顯3個分支：A簇（Candida rugosa及Candida mesorugosa所有菌株）、B簇（Cand

6、ida neorugosa）和C簇（Candida pseudorugosa）。
　　5.所研究菌種標準株在系統(tǒng)發(fā)育樹上的位臵與文獻中報道結(jié)果一致，進一步驗證了Candida rugosa及其相鄰3類菌種歸為Diutina屬的合理性，本研究對相關菌株作出了相應的屬名更改。
　　6.Diutina mesorugosa和Diutina rugosa菌株間的形態(tài)特征無差異性；碳源同化能力一致；在MLST系統(tǒng)發(fā)育樹中，現(xiàn)命名為Di

7、utina mesorugosa的7株菌株在系統(tǒng)發(fā)育樹中均屬于Diutina rugosa分支；Diutina rugosa和Diutina mesorugosa的復合基因序列同源性范圍是98.1％~98.9％。
　　結(jié)論：
　　1.MLST分析能夠更準確的推測近緣菌種間的進化親緣關系。
　　2.結(jié)合屬名更改文獻報道，建議將Diutina mesorugosa（原命名Candida mesorugosa）歸入Diuti

8、na rugosa（原命名Candida rugosa）這一菌種分類范圍內(nèi)，Diutina neorugosa（原命名Candida neorugosa）和Diutina pseudorugosa（原命名Candida pseudorugosa）則仍應被視為Diutina屬下的不同菌種。
　　3.對于某些分化程度較高的酵母菌目菌株的分類研究不能僅依賴于ITS、LSU等單基因分析，應結(jié)合相應的形態(tài)學鑒定、生理生化鑒定及多基因聯(lián)合分類